Patates böceği (Leptinotarsa decemlineata Say.)`ne dayanıklı bitkiler elde etmek amacıyla patates (Solanum tuberosum L.)`in genetik transformasyonu

Abstract

PCAMBIA1301 ve pGA482GG plazmidlerini içeren Agrobacterium tumefaciens'in EHA101 izolatları, iki patates çeşidinin genetik transformasyonunda kullanılmıştır. Hpt ve Cry 1A(c) genlerini taşıyan pCAMBIA1301 plazmidi higromisin B antibiyotiğine ve bazı böceklere karşı dayanıklılık sağlamaktadır. NptII ve Gus genlerini taşıyan pGA482GG plazmidi sırasıyla kanamisin antibiyotiğine dayanıklık ve transformatlara görünebilirlik sağlamaktadır. Genetik transformasyon çalışması ?Marfona? ve ?Granola? patates (Solanum tuberasum L.) çeşitlerinin yaprak ve internodium doku parçalarında yapılmıştır. Npt II ve GUS genlerini içeren transgenik patates bitkileri 50 mg/l kanamisin, Cry 1A(c) genini içeren transgenik sürgünler ise 10 mg/l higromisin B içeren L ortamında sırasıyla selekte edilmiştir. ? -glukuronidaz aktivitesi histokimyasal GUS analizi ile Npt II geni içeren bitkilerde saptanmıştır. GUS pozitif sonuç veren bitkilerden 10 tanesinde GUS geni için PCR yapıldığında, 9 örnek gene spesifik 660 bp DNA bandı oluştururken, Npt II geninin test edildiği 10 bitkinin PCR analizinde ise 7 tanesi pozitif sonuç vermiştir. Higromisin B antibiyotiğine dayanıklı olarak seçilen toplam 55 adet patates bitkisinden 35 adedinin kesin olarak Hpt genini içerdiği PCR analizi ile çoğaltılan spesifik 700 bp DNA fragmenti ile saptanmıştır. ?Marfona? patates çeşidine ait 5 adet transgenik yumrularda Hpt genin varlığı da PCR analizi ile gösterilmiştir. Hpt geni içeren transgenik ?Marfona? ve ?Granola? patates çeşitleri Patates Böceği ile biyolojik olarak testlenmiştir. Yapılan Biyolojik testlemede transgenik ?Marfona? ve ?Granola? bitkileri üzerinde beslenen patates böceği larvalarında % 80-85 oranında ölüm meydana geldiği gözlenmiştir.

Two different EHA 101 isolates of Agrobacterium tumefaciens harbouring pCAMBIA1301 and PGA482GG plasmids were used for the genetic transformation of two potato varieties. The plasmid, pCAMBIA 1301 carrying Hpt gene provides resistance to antibiotic of hygromycin B, and Cry 1A(c) gene provides resistance to some insects. The plasmid, pGA482GG carrying Npt II provides resistance to antibiotic of kanamycin and GUS provides visible transformants. Genetic transformation was conducted on leaf and tissue fragments of Marfona and Granola Potato (Solanum tuberasum L.) varieties. The transgenic patato plants contaning Npt II and GUS genes in 50 mg/l kanamycin and transgenic outgrowth contaning Cry 1A(c) gene in 10 mg/l hygromycin B, were selected in L medium. ? -glucuronidase activity in plants contaning Npt II and GUS genes were determined by the analysis of histochemical GUS assay. The PCR process conducted on ten plant with GUS positive resulted in nine plant samples generating specific 660 bp DNA band. The PCR process for Npt II gene resulted in seven positives out of eleven samples. Thirty-five plants out of fifty-five plants resistant to hygromycin B antibiotic, were determined by specific 700 bp DNA fragment reproduced with PCR analysis to have Hpt gene. In the five transgenic microtubers of Marfona variety was also determined to have Hpt gene. Transgenic Marfona and Granola potato varieties having Hpt gene were biologically tested with potato beetles. Testing showed that % 80-85 of larvas of potato beetles lived on transgenic Marfona and Granola varieties died