Kurbağa gastrik mukozasında K-H ATPaz enziminin kinetik özellikleri ve oluşturulan ülser modelinde enzim aktivitesi

Abstract

Bu çalınma Çukurova üniversitesi Tıp Fakültesi Biyokimya Anabilim dalında yapılmıştır, çalışmada kademeli vs sukroz-ficoll gradyan satrifüj- leme yöntemleri kullanılarak kurbağa gastrik mukozasına ait vezikül ler hazırlanmıştır. Vezikül fraksiyonunun saflığı pozitif ve negatif işaretle yici enzimler ve elektron mikroskopisi kullanılarak gösterilmiştir. Sapta dığımız en uygun inkübasyan ortamı kullanılarak tüm fraksiyonlarda enzimin spesifik aktivitesi ölçülmüş ve spesifik aktivitenin fraksiyonlara göre dağılımı incelenmiştir. Enzim için en yüksek spesifik aktivitenin vezikül fraksiyonunda olduğu saptanmış ve bu fraksiyonda enzimin kaba homojenata aranla 10 kez daha saf last ırılmıs olduğu saptanmıştır. Aktivitenin en yüksek olduğu vezikül fraksiyonu kullanılarak çizilen Lineweaver-Burk ve Hill grafiklerinden optimum âktivite, ?`,«« = 63.3 umolPi. mgprot-'.saat`1, ATP için Kichealis- Renten sabitesi Km = 95.2 u», Hill katsayısı 0.91 ve K~ için Km = 1.3 mK, Hill katsayısı 0.97 olarak bulunmuştur. Saklama kosulllarına ve süresine bağlı olarak enzim aktivitesinin değişmekte olduğu ve en uygun saklama koşulunun - 40 *C de tutulan % 40 <v/v) gliserol çözeltisi olduğu saptanmıştır. çalışmada ülser modeli geliştirilerek kurbağa midelerinde invitro ülser oluşturulmuş, ülserasyonun başlamasından birinci derecede besleyici çözeltideki yetersiz HCCVun sorumlu olduğu gösterilmiştir, ülserasyon91 iglemi sırasında K`*-H~ ATPası uyarıcı herhangi bir ajan kullanılmamasına ragmen ülserli gruba ait örneklerde enzimin çeşitli fraksiyonlara göre dağılımının uyanla»? örneklerden side edilen faksiyonlarda gösterdiği dağılıma benzer bir dağılım gösterdiği saptanmıştır. Bu da ülserasyon sırasında K^-H`* ATFazı uyaran bir mekanizmanın Ulşer oluşumunda etken olduğunu göstermektedir. Literatür bilgilerimizin ve bulgularımızın vsıgı altında bu uyarıcı mekanizmanın mukozal hasara bağlı olarak artmış histamin salgılanması ve/veya KC1 geçirgenliği nedeniyle olabileceği ortaya konmuştur. Ancak bu faktörlerin tek bağlarına mı yoksa birlikte mi etkili olduklarının dana sonraki çalışmalarla ortaya konması konuya daha çok açıklık getirecektir.

TMs research was carried out at the Biochemistry Department, Faculty of Medicine, Çukurova University. la the study, microsomal vesicles from frog gastric mucosa were prepared by using differential and density gradient < sucrose- ficoll) centrifugation techniques. Purity of the vesicular fractions «ere shown by using positive and negative marker enzymes as well as electron microscope. Using the best suitable media, we determined, the specific activity of the enzyme were measured at all fractions and the distribution of it were investigated. ît was determined that the highest specific activity for the enzyme was at the vesicular fraction and figured out that the enzyme at this fraction was ten tines more purified than the crude homogenate. From the Lineweaver-Burk and Kill's plots drawn by using the vesicle fraction having the highest activity, optimum activity, Mchealis-Kenten and Hill constants for ATP and K`` were, in turn, found as Ym«.« = S3. 3 usol Pi. mg prof1, saat-1, Km = 95,2 pS, 0.91 and Km = 1.3 ml, 0,97, respectively. It was determined that the enzyme activity varies depending upon the storage duration and conditions. It was also obtained that 40 % <v/v)glycerol solution when feept at - 40 *C was tîıs best suitable storage condition. îa the study, aa in vitro ulcer model was developed by usiag frog gastric mucosal sacs. It was shown that deficiency of HCO-* in nutrient solution was primarily respoasible for the development of ulcer. During ulceration progress although no stimulating agent for K*-H* ATPase were used, it was determined that the distribution of enzyme in different subcellular fractions of ulcerated mucosa were similar to the distribution of enzyme in stimulated mucosal preperations. In the light of our results and the literatüre, we reviwed, the stimulatory mechanism may involve increased histamine secretion and / or increased KC1 permeabilty. it is obvious that the further studies concerning determination of the above mentioned mechanism might clarify this subject.