Farede perifertilizasyon atlası ve kullanılan temel yöntemler

Abstract

-51- ÖZET Farede germ hücresi ve döllü ürünler ©ide etmede kullanılacak yön temleri «saptama ve bir perif ertiliaraeyon atlasa hasırlamayı amaçlayan bu araştırmamızda laboratuvarında üretilmiş 50 dişi ve 20 erkek fare kullanılmış, yapılan operasyonlarda ve deney sarasında 8 erkek ve 13 dişi kaybedilmiştir, Araştırmada denekler ası ve nemi sabit tutulan, iyi havalandırılmış odalara yerleştirilmiş krom-nikel kafeslere konmuş, ad libidum içme suyu ve ek gıda ve vitamini desteklenmiş pellet yem verilmiştir. Çalınmalarda pentotal anestezisi kullanılmış olup vasektomi için laboratuvarımı»da geliştirilen bir yöntem» ovidektomi için standard cerrahi girişim uygulanmıştır. 20 erkek farenin 8 tanesin© vasrektomi uygulanmış olup bu hayvanlar döllenmemiş yumurta eldecinde kullanılmışlardır. Deneklerden 14 tane sinden sperm pr ©par ata hasırlanmış olup bu preparatların 4 tanesinde spermler % 70 hareketsiz bulunmuşlardır. Spermlerin incelenmesinde He- matoküiîen'-fioain ile Siemea boyaması uygulanmış olup 6iem©a boyamanın daha kolay ve daha pratik olduğu saptanmıştır. Süper ovülayctn için dişi fareler© 48 saat ara ile i.p. uygulanan 5 ÎU FSHA.H (Humegon) ve 5 ÎU hCQ (Pregnyl) *in en uygun şema olduğu gözlenmiştir. 18 dişi döllenmemiş yumurta ©İdesi için kullanılmış olup deneklerin 8 tanelinde vajinal tıkaç görülmüş, kopülasyon yapmış dişilerdeki yumurta veriminin kopülasyon görülmeyen dişilerden anlamlı olarak daha yüksek olduğu gözlenmiştir. Döllenmiş yumurta eldesi işin B9. dişi fare kullanılmış olup vajinal tıkaç görülen t% hayvan ameliyata alınmıştır. Döllü yumurta e İde» i için her kafese î erkek ve 1 dişi konulmuş} oineel ilgisrialik halinde kafeste ikinci bir erkek ilavesinin kopülasyon arttırdığı sap tanmıştır. Döllü yumurta ve preembr iyonik gelişmenin farklı evrelerini teetoit için p.c. belli saatlerde cerrahi girişim uygulama gerektiği, ancak be durumda dahi elde edilen yumurtalarda senkronisrasyon bulunmadığı göz lenmiştir..62- Perifertil ixasyon döneminde alman hücrelerin incelenmesinde fa* kon fer a» i: «istem takılı invert mikroskop kullanma gereği saptanmış olup bu Örneklerin fotoğrafla tesbitinde çeşitli filtreler kullanılmasının yararlı olacağı görüşüne varılmış ve p.c. j?aman ekseni üzerinde sapta nan resimleri© fareye* ait bir perifertili rasyon atlası oluşturmak mümkün olmuştur, SUMMARY This study was performed for the preparation of the per if erfc i lixa- tion atlas for mouse and the standardisation of avai&bl© method to get g®rm ©ell® ami sperm i o product. Ouring the experiments, SO female and 20 male mice, which are reseeded in our laboratories were used. Among these ?1 of them (B male, 13 female) were lost during the pro cess. The species were preserved in crom-niek«*l ©ages located in constant temperature in dampness and refreshed rooms. The mice were fed by palet foods containing vitamine ®nd some other nourishment and by ad- 1 ihidum water. While using the standart surgical approach for oviodektomy. a new method which was created in our laboratory was used for vasectomy. During the operation pentothal anestesria was u®mtl for both of the cases. Vasectomy was performed for 8 out of the 20 mac© mr>6 they were used to obtain unfertilised eggs. Sperraium speoiemens were prepared form 14 ©peciemens and ?0 % immotilc* spermi um was observed in 4 of them. In {»perm i urn investigation h@motok©ilen-`©ozin and giemsa dyeing tectbinique® were u@®$ mnd because of its simple and practical application giemsa dyeing was prmf@r&â to the other. The administration of 5SU PSH-İH CHumagon) and 5IU'HC$ <Pr©gnly> to female mow&® in ©very 4® hours was chosen as the bee? t protocol for super o vu 1 a t i on.

.62- Perifertil ixasyon döneminde alman hücrelerin incelenmesinde fa* kon fer a» i: «istem takılı invert mikroskop kullanma gereği saptanmış olup bu Örneklerin fotoğrafla tesbitinde çeşitli filtreler kullanılmasının yararlı olacağı görüşüne varılmış ve p.c. j?aman ekseni üzerinde sapta nan resimleri© fareye* ait bir perifertili rasyon atlası oluşturmak mümkün olmuştur, SUMMARY This study was performed for the preparation of the per if erfc i lixa- tion atlas for mouse and the standardisation of avai&bl© method to get g®rm ©ell® ami sperm i o product. Ouring the experiments, SO female and 20 male mice, which are reseeded in our laboratories were used. Among these ?1 of them (B male, 13 female) were lost during the pro cess. The species were preserved in crom-niek«*l ©ages located in constant temperature in dampness and refreshed rooms. The mice were fed by palet foods containing vitamine ®nd some other nourishment and by ad- 1 ihidum water. While using the standart surgical approach for oviodektomy. a new method which was created in our laboratory was used for vasectomy. During the operation pentothal anestesria was u®mtl for both of the cases. Vasectomy was performed for 8 out of the 20 mac© mr>6 they were used to obtain unfertilised eggs. Sperraium speoiemens were prepared form 14 ©peciemens and ?0 % immotilc* spermi um was observed in 4 of them. In {»perm i urn investigation h@motok©ilen-`©ozin and giemsa dyeing tectbinique® were u@®$ mnd because of its simple and practical application giemsa dyeing was prmf@r&â to the other. The administration of 5SU PSH-İH CHumagon) and 5IU'HC$ <Pr©gnly> to female mow&® in ©very 4® hours was chosen as the bee? t protocol for super o vu 1 a t i on.-S3- 18 female mice were us>ed for* obtaining unf ert i Hied eggs, and m va ginal plug developed in 8 of them. The number of eggs obtained from copul&ted females was eignif inantly mor*© then the ona obtained from noncopu 1 ated one». B7 female mice were w&ed to obtain fertilized egg® and ?i mice with vaginal plug were operated. For the estimation of fertilized eggs I male and 1 female mouse were located in the same cage together. When the sexual disconnection was observed, an extra male mouse was added to the eame cage and mm a result of this* proce®©. the copulation pereanfcag© has been increased, Surgioal treatment was performed in certain hours for evaluating the different shapes of preembriyonio development of fertilised eggs, but no sertcroni nation wa© observed between th© egg® under thi® «ond i t i on. It wa« decided that ptmsie contract mi©ro©oop© was necessary for the investigation of the cells whioh were taken in per i fert i ligation periods. It i& possible to form a peri fertilization atlas of mouse by taking serial postcoital photographs.