Anestezik maddelerin fare karaciğer G6PD enzim aktivitesine etkisi

Abstract

6. ÖZET G6PD enzimi pentoz fosfat yolu kilit enzimi olup kofaktör olarak NADP, aktivatör olarak da Mg+2 kullanmak tadır. Pentoz fosfat yolunda. G6PD enzimi Glukoz-6-f osf at ı 6 f osf oglukolaktona çevirirken reaksiyon sonucunda da NADPH oluşmaktadır. Bu yolda sentezlenen NADPH biyosentetik reaksiyonlarda ve serbest radikal lerni detoksi f ikasyonunda görev alan önemli bir koenzimdir. însan ile fare G6PD enziminin homolojı göstermesinden dolayı amacımız: fare karaciğer G6PD enzim aktivitesinin fareler arasıda farklı olup olmadığı, günlük degisım gösterip göstermediği. enzimin ısıya dayanıklı olup olmadığı ve Haiotan anestezisinin en2im üzerine etkisi olup olmadığı ve G6PD enziminin kinetik özelliklerini incelemeyi amaçladık. Bu amaçla inbret lenmemis Mu s musculus albino erkek fareler 4 grupta incelenmiştir. Hıstopatolo j ik inceleme sonuçlarına göre I. grupta normal karaciğeri! fare 1 el r kontrol grubunu. II. grupta patolojik karaciğeri i fareler hasta grubu oluşturmaktadır. I. hafta ve II. hafta anestezi verilen fareler ise III. ve IV. grubu oluşturmaktadır. Dört gruptaki farelerin vücut ve karaciğer ağırlığı yönünden ölçülmüş olup vücut ağırlığı 28.5-32.8 g. karaci ğer ağırlığı 1.370-2.093 g olarak bulunmuştur. Dört grup arasında vücut ve karaciğer ağırlığı yönünden fark bulunma- 133mistir. Fare karaciğerinde en iyi aktivite verecek ideal homojenatı bulmak için dört farklı şekilde homojenat (KC1. Sukroz. KC1+NADP. Sukroz-fNADP) hazırlanmış olup, G6PD enzim aktivitesi yönünden dört homojenatta farklılık bulunmamış¬ tır. Fare G6PD enzim aktivitesi -70`C ve -25`C'de 30 gün dayanırken. 4-4` C'de 7 günde. oda ısısında ise 2 gün de aktivite kaybına uğradığı saptanmıştır. Fare eritrosit ve karaciğer G6PD enzim aktivitesinin fareler arasında farklılık gösterdiği bulunmuştur. Fare eritrosit G6PD.enzim aktivitesi 30.630 ± 1.905 ü/g Hb, karaciğer G6PD enzim aktivitesi 0.031 ± 0.003 ü/mg Protein olarak bulunmuştur. Halotamın karaciğer G6PD enzim aktivitesi üzerine etkisi olup olmadığını incelemek için farelere l hafta ve 2 hafta süreyle halotan verilmiştir. îlk bir haftada anesteziye bağlı olarak G6PD enzim aktivitesi düşerken, ikinci haftada G6PD enzim aktivitesi Halotan vücuda adapte olduğundan normale döndüğü saptanmıştır. 2 hafta sonra G6PD enzimi normal dönmesine rağmen anestezi sonunda dokuda harabiyet oluştuğu gözlenmiştir. Fare G6PD enzim kinetik özelliklerinin de fareler arasında farklılık gösterdiği bulunmuştur. Fare G6PD enziminin Km^ısr- değeri 35.7-90.9 uM arasında iken. KniNAOp değeri ise 1.5-12.1 uM arasındadır. Substrat analoglarından 2-deoksi-glukoz-6 fosfatı bazı farelerin kullandığı, bazı farelerin hiç kullanmadığı gözlenmiştir. Ayrıca substrat, ana logl arından biri olan Galaktoz-6-fosfatı 134ise hiç bir farenin kullanmadığı gözlenmiştir.Ayrıca fare karaciğer G6PD enzimi loblara göre farklılıkgöstermekte olup. en fazla G6PD enzim aktivitesi ortasağ lobda bulunmuştur.

7. SUMMARY G6PD enzyme is the key enzyme of pentose phosphate pathway. G6PD uses NADP as an cof actor and magnesium (Mo*-13) as an activator. 62ucose-6-phosphate is changed to 6- phosphogl neonate by G6PD and. NADPH is the product of this reaction. NADPH is a coenzyme which takes part in many biosynthetic reactions and detoxification of free radicals. G6PD enzyme of human and mouse indicate homology. Thus our aim is: to measure the activity of G6PD in mouse liver and see if there are differences amona mice; to note daily fluctuations, to measure heat resistance and the effects of halothane anesthetic on enzyme activity and study the kinetics of G6PD enzyme of mouse liver. For this reason, male non-inbred albino Mas musculus was taken into study in four separate groups. According to the results of histopathologic research: the first group consisted of normal mouse liver that was the control. The second group had pathologic liver: mouse given anesthetic for one week and for two weeks consisted the third and the fourth group, respectively. Body weights and liver weights were measured in all four groups and the means were 28.5-32.8 g. 1.370-2.093 g respectively. No significant difference were found among the groups. In order to find the best conditions for measuring G6PD activity. four different homogenizing media were prepared (KC1. Sucrose. 136KC1+NADP. Sucrose+NADP). No significant difference was obtained among the media. The effect of T in G6PD activity was investigated and It was found that G6PD enzyme was stable at -70 *C and -25°C for 30 days, at 4°C for 7 days whereas the activity was lost in 2 days at room temperature. Erythrocyte and liver G6PD activity was found to differ among mice. The mean for erythrocyte G6PD activity was 30.690 ± 1.905 ü/g Hb and for liver was 0.031 ± 0.003 u/mg Protein. To see the effect of hal ethane on mouse liver G6PD. the anesthetic was given for one and two weeks. The liver G6PD showed a decrease m the first week but mice that were exposed to hal ethane for two weeks seemed to adapt themselves and iıver G6PD activity was found to be normal. However, histopathologic differences were seen. The kinetics of mouse liver G6PD showed differences among individuals. Km for G6P was 35.7-90.9 uM and Km for NADP was 1.5-12.1 uM. The analogue of G6P. 2-deoxy-glucose 6-phosphate. was utilized by some mice nut not by others. Also, it was found that none of the mice used galactose-6- phosphate. Another finding was that liver lobes differed in G6PD activity; the highest, activity was noted in the right lobe. 137