Leishmania örneklerine ait total DNA`larının izolasyonu, saflaştırılması ve restriksiyon endonükleaz profillerinin incelenmesi

Abstract

ÖZET Leishmania Örneklerine Ait Total DNA'larının izolasyonu, Saflaştırılması ve Restriksiyon Endonükleaz Profillerinin incelenmesi Çukurova ve. Şanlıurfa bölgelerinde; Sivrisinek ve Flebotomlara karşı mücadelede kullanılan insektisitlere rağmen, kutanöz Leishmaniazis her geçen gün yayılım göstermektedir. Leishmanialarda oluşan direnç sonucu, bu ajanlarla mücadele etmek zorlaşmakta ve yeni ilaçlar gerekmektedir. Mücadele zorlaştığı gibi büyük bir iş kaybı görülmektedir. Her an kutanöz Leishmaniazis ajanlarının viskerotropik enfeksiyon ajanları olabilme tehlikesi vardır. Bu çalışmada ana amaç; elde edilen izolatlar arasında genotipik olarak farklılık olup olmadığını, örneklerin referans suşlara genotipik olarak benzeyip benzemediğini tesbit etmektir. Çukurova ve Şanlıurfa bölgelerinde kutanöz Leihmaniazisli hasta bireylerden toplam 25 örnek kültüre alındı. Örnek ve referans suşların total DNA'ları izole edildi. Total DNA; EcoRI, Hindlll, Hinfl, Haelll, Alul ve Rsal restriksiyon enzimleriyle kesilerek, bunların restriksiyon fragman profilleri çıkarıldı. Örneklerin restriksiyon fragmanları hem kendi aralarında hem de her bölgenin örnekleri kendi içinde değerlendirildi. Ayrıca elimizde bulunan 14 referans susun total DNA restriksiyon fragmanlarıyla karşılaştırıldı. Çalışma sonuçlarına göre; Çukurova ve Şanlıurfa izolatları arasında genotipik olarak heterojenite belirlenmesinin yanında, her bölgenin kendi içinde de heterojenite tesbit edildi. Yapılan DNA profil karşılaştırmalarına göre; izolatların kimi DNA fragmanlarının referans suşların fragmanlarına benzediği görüldü. Ancak hiç bir izolat, referans suşlarla bire bir benzerlik göstermedikleri belirlendi. Anahtar Sözcükler: Kültür, Leishmania İzolasyonu, Restriksiyon Endonükleazlar, RFLP Analizi, Total DNA

ABSTRACT In Leishmania Specimens, Total DNA Isolation, Purification and determination of Restriction Endonuclease Profiles In Çukurova and Şanlıurfa regions, in spite of the insecticides used against to Mosquito and Phlebotomus, cutaneous Leishmaniasis is spreading day after day. As a result of resistance in Leishmania sp. the struggle against these agents has been difficult and new drugs are required. The strugle has not only been difficult but also time consuming. It has always been possible that cutaneous leishmaniais can transform into viscerotropic. The goal of this study was the identification of genotypic differences between isolates and try to find out weather there are similarities genotypically with reference strains or not. Samples (25) were collected from patients who were effected by cutaneous Leishmaniasis in Çukurova and Şanlıurfa domains. Total DNAs were isolated from these samples and referans strains, the total DNAs of which were digested with EcoRI, Hindlll, Alul, Hinfl, Haelll and Rsal restriction endonucleases. The restriction fragment profiles of isolates were compared with each other and, also, with others of 14 referans strains, According to the electrophoretic results obtained in this study, genotypic heterogenities were observed between Çukurova and Şanlıurfa isolates and, also, in each region itself. In the comparision of DNA fragments of reference and isolates it was observed that there may be slight similarities between but never an exact one at all. Key Words: Cultur, Leishmania Isolation, Restriction Endonucleases, RFLP Analysis, Total DNA XI