Azoospermik insan testis biyopsi örneklerinde endotelyal nitrik oksit sentazın immünohistokimyasal lokalizasyonu

Abstract

ÖZET Azoospermik İnsan Testis Biyopsi Örneklerinde Endotelyal Nitrik oksit Sentazın İmmünohistokimyasal Lokalizasyonu Nitrik oksidin (NO), erkek infertilitesindeki olası rolünün, immünohistokimyasal yöntemle araştırılması için yapılan bn çalışmada, Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Üroloji Anabilimdalı polikliniğine, infertilite yakınması ile başvuran ve azoospermik olduğu belirlenen 12 hastanın testis biyopsi Örnekleri kullanılmıştır. Kontrol grubu olarak ise, yine aynı poliklinikte primer prostat kanseri nedeniyle orşiektomi yapılan 6 hastanın testis dokuları çalışmaya dahil edilmiştir. Dokularda, nitrik oksidin lokalizasyonunu gösterebilmek amacıyla, endotelyal nitrik oksit sentaz (eNOS) enzimine karşı üretilmiş antikorlar kullanılarak immünohistokimyasal işaretlenme yapılmıştır. Ayrıca, azoospermik testislerdeki eNOS lokalizasyonunun, ince yapı düzeyindeki değişikliklerle korelasyonunu araştırmak amacıyla da, testis dokuları, transmisyon elektron mikroskobu ile incelenmiştir. İmmünohistokimyasal inceleme sonucunda, olgularda en yoğun işaretlenmenin Leydig hücrelerinde görülmesi, bu hücrelerdeki testosteron sentezinde nitrik oksidin önemli etkileri olabileceğini düşündürmüştür. Leydig hücrelerinin bazılarının yoğun işaretlendiği, bazılarının ise hiç işaretlenmediği gözlenmiştir. Bu durumun, Leydig hücrelerinin içinde bulunduğu farklı aktivasyon fazlarını simgeliyor olabileceği sonucuna ulaşılmıştır. Miyofibroblastlarda, eNOS için işaretlenme yalnızca Sertoli cell only olgularında bulunmuştur. Miyofibroblastlarm artmış nitrik oksit aracılığıyla gevşemeye yol açarak, azalmış olan tübül çapını artırmaya çalışıyor olabileceği ve/veya nitrik oksidin antihiperplazik etkisinden dolayı, miyofibroblast hiperplazisine karşı sentez ediliyor olabileceği düşünülmüştün Sertoli hücrelerinde eNOS için işaretlenmeye yalnızca spermatogenezisin bozulmuş olduğu olgularda rastlanılmıştır. Başlangıçta bozulmuş spermatogenezisi iyileştirmek için artan nitrik oksidin, sonuçta spermatogenezisin bozulmasına neden olabileceği mümkün olarak değerlendirilmiştir. Ayrıca, apoptotik germ hficreterindeki işaretlenme, nitrik oksidin apoptoziste önemli işlevi olduğu şeklinde Elektron mikrografiarda, Leydig hücrelerinde Reinke kristallerinin, spermatogenezisin bozulduğu olgularda arttığı ve, yine bu hücrelerde NO üretimindeki hafif azalma sonucunda bilinmeyen bir mekanizma ile Reinke kristali oluşumunun artabileceği düşünülmüştür. Tüm bu bulgulara göre, nitrik oksidin erkek infertilitesinde oldukça önemli görevleri olabileceği ve bu maddenin sentezini uyaran veya engelleyen ilaçların, infertilite tedavisinde, farkta olgularda kullanılabileceği sonucuna ulaşılmıştır. Anahtar Sözcükler: Erkek İnfertilitesi, Nitrik Oksit Sentaz, Testis, İmmünohistokimya, Ultrastrüktür.

ABSTRACT Immunohistochemical Localisation of Endothelial Nitric Oxide Synthase in Azoospermic Human Testis Biopsy Samples In this study, testis biopsy samples of 12 azoospermic patients, who applied to Çukurova University Medical Faculty Urology Department with infertility complaints, were used to search the possible role of nitric oxide synthase (NO) in mate infertility by immunohistochemical methods. Testis tissues of patients orchiectomised in the same department due to primary prostate cancer were included in the study as the control group. Immunohistochemical labelling was applied by using antibodies produced against endothelial nitric oxide synthase (eNOS) enzyme to detect the localisation of nitric oxide. Furthermore, testis tissues were examined with the transmission electron microscope (TEM) to investigate the correlation of the changes at the ultrastructural level with the eNOS localisation in azoospermic testis tissues. According to the results of immunohistochemical research, the determination of the most intensive expression of eNOS in Leydig cells has lead to think the important effects of nitric oxide in testosteron synthesis in these cells. Whereas some of Leydig cells were intensively labelled, some were not. It was suggested that these findings may symbolize the different activation phases of Leydig cells. The labelling in myofibroblasts for eNOS was found solely in Sertoli cell only cases. It was thought that nitric oxide strives to increase the decreased tubule diameter by causing relax in myofibroblasts and/or synthesis against myofibroblast hyperplasy due to antihyperplastic effect was a possibility. In Sertoli cells, labelling for eNOS was only encountered in cases of impaired spermatogenesis. It was evaluated that increased nitric oxide to improve the impaired spermatogenesis at the beginning might consequently caused the impairment of spermatogenesis. Furthermore, labelling in the apoptotic germ cells was interpreted as a considerable function of nitric oxide in apoptosis. In electron micrographs, increase of Reinke crystals in Leydig cells was noticed at the cases of impaired spermatogenesis and quite decrease in NO production was considered to be the cause of increased formation of Reinke crystals by an unknown mechanism. These results support the hypothesis that nitric oxide may exert considerable role in male infertility and the drugs, which stimulate or inhibit the synthesis of this substance, can be used in different cases in infertility treatment Key Words: Male infertility, Nitric oxide synthase, Testis, Immunohistochemistry, Ult restructure. XI