Leishmania infantum DNA aşısı adayı LACK geninin klonlanması

Abstract

Leishmania cinsi zorunlu hücre içi protozoonların neden olduğu leishmaniasis, Dünya Sağlık Örgütü?nün önemli tropikal hastalıklar listesinde yer almaktadır. Leishmaniasis tedavisinde rutin olarak kullanılan bileşiklerin yüksek maliyetleri, toksisite ve yan etkilerinin fazla olması nedeniyle alternatif tedavi ve aşı araştırmaları devam etmektedir. Henüz efektif bir aşı geliştirilememiştir. Leishmania infantum homolog aktive edilmiş C kinaz reseptör (LACK) geni üçüncü nesil aşılar olarak kabul edilen DNA aşı adaylarından biridir ve en umut verici adaylar arasındadır.Bu çalışmada, yaygın Leishmania türlerinden biri olan L. infantum LACK geninin klonlanması amaçlanmıştır.Çalışmada öncelikle L. infantum promastigot kültüründen genomik DNA izolasyonu yapılmıştır. Sonra LACK geni, pJET1.2 plazmidine klonlama reaksiyonu ile yerleştirilmiştir. Daha sonra rekombinant plazmidin kompetan hücrelere transformasyonu yapılmıştır. Rekombinant plazmidin varlığı ise, PCR tarama ile araştırılmıştır. Pozitif kolonilerden miniprep yapıldıktan sonra klonlama; PCR, restriksiyon enzim deneyleri ve son olarak DNA dizi analizi yöntemleri ile doğrulanmıştır. Sonuç olarak leishmaniasise karşı en umut verici DNA aşı adaylarından olan ve L. infantum promastigotlarından izole edilen LACK geni klonlanmıştır.

Leishmaniasis is caused by an obligate intracellular protozoa Leishmania genus and listed in the major tropical diseases by World Health Organization. Because of the high costs, toxicity and adverse effects of the compounds which are routinely used in the treatment of leishmaniasis, alternative treatment and vaccine studies are currently underway. An effective vaccine has not been developed yet. Leishmania infantum homolog activated C kinase (LACK) gene is one of the DNA vaccine candidates that considered as third-generation vaccines, and also one of the most promising candidates.This study aimed to cloning of LACK gene from one of the common types of Leishmania genus, Leishmania infantum.In this study, primarily L. infantum genomic DNA was isolated from promastigote culture. Then, LACK gene placed into plasmid pJET1.2 by clonning reaction. Then, recombinant plasmids were transformed into competent cells. The presence of recombinant plasmids were determined by PCR screening. Cloning confirmed by PCR, restriction enzyme assays and finally DNA sequence analysis, after making miniprep from positive colonies. As a result, one of the most promising DNA vaccine candidates against leishmaniasis, LACK gene, which is isolated from L.infantum promastigotes, have been cloned.