Brusellozis tanısında polimeraz zincir reaksiyonunun etkinliğinin serolojik yöntemlerle karşılaştırılması ve virülans genlerinin saptanması

Abstract

Amaç: Bruselloz, çoklu organ tutulumu ile ilerleyen zoonotik bir enfeksiyondur.Klasik tanıda kullanılan kültür ve serolojik testler uzun süre gerektirmekte ve yanlışnegatif olarak sonuçlanabilmektedir. Bu çalışmada, hızla gelişen ve birkaç saattesonuçlanabilen bir tanı yöntemi olan PCR'ın bruselloz tanısındaki etkinliği araştırılmıştır.Materyal ve Metot: Çalışmaya, hastanemizde 01 Ocak 2018 ile 31 Temmuz 2018tarihleri arasında saptanan 60 hasta ve 60 kontrol numunesi dahil edildi. Numunelerdereal-time PCR yöntemi ile Brucella spp. DNA'sı araştırıldı ve pozitif örneklerde PCRyöntemi ile tür ayrımı ve virülans genleri çalışıldı. PCR yönteminin tanı etkinlik değerlerihesaplandı.Bulgular: Hasta numunelerinin sekizinin kan kültüründe Brucella spp. üremesioldu. Serolojik yöntemlerle antikor saptanan 60 hastanın 50'sinde akut hastalık göstergesiolan ≥1/160 titre değeri mevcuttu ve bu hastaların 32'si akut hasta, geri kalan 18'i isetedavi altındaki hastalardı. Yapılan real-time PCR testi ile hasta grubunda 19 örnekteBrucella spp. DNA'sı saptanırken, bu türlerin hepsi Brucella melitensis olarak belirlendiPozitif örneklerin hepsinde omp19, wbkA, manA, mviN, ure ve perA virülans genleripozitif bulundu. PCR'ın hasta grubu ve akut hastalar için saptanan duyarlılığı sırasıyla%31.6 ve %59.3; özgüllük ve Pozitif Prediktif Değeri %100 ve akut hastalar için NegatifPrediktif Değeri ise %87.1 olarak hesaplandı.Sonuç: Çalışmamızda, Brucella PCR testi ile akut hastaların yaklaşık %60'ınıntanısının yapılabildiği, bu testin özgüllüğünün mükemmel düzeyde olduğu, olgularınınhepsine B. melitensis'in neden olduğu ve suşların tüm önemli virülans genlerini taşıdığısaptanmıştır. Daha hassas saptama limiti olan PCR kitlerinin geliştirilmesi ve hastadanuygun dönemde numune alınması ile PCR'ın bruselloz tanısındaki etkinliği artacaktır.Anahtar Kelimeler: Brucella spp., Bruselloz, Serolojik Testler, PCR, Virülans.

Aim: Brucellosis is a zoonotic infection that progress with multiorganinvolvement. The classical diagnostic methods, including culture and serological tests,require long time to be completed and may yield false negative results. In this study, theperformance of PCR, as a rapidly-developing method that is able to give results withinhours, was aimed to be evaluated on the diagnosis of brucellosis.Material and Method: A total 60 patients and 60 control patients' samples whichwere assessed between January 1st, 2018 and July 31th, 2018 in our hospital were included.Brucella spp. DNA was investigated in the clinical samples with real-time PCR method,and species typing and virulence genes were studied with PCR. The diagnostic efficacyof PCR method was analyzed.Results: Brucella spp. growth occurred in eight of the patients' blood cultures.Fifty out of 60 patient samples which were found positive for antibody were determinedas having ≥1/160 serum titer, and 32 of them having acute disease. Resting 18 patientswere accepted as the patients who were currently under treatment. In the real-time PCRanalysis, DNA of Brucella spp. were found positive in 19 samples in the patient group.Brucella melitensis were identified in all PCR-positive samples, and all these sampleswere also found positive for all the studied virulence genes including omp19, wbkA,manA, mviN, ure and perA. Of the PCR method, the sensitivity for patients group andacute patients were found as 31.6% and 59.3%, respectively; specificity and PositivePredictive values were determined as 100%, and Negative Predictive Value for acutepatients was found as 87.1%.Conclusion: In this study, it was determined that Brucella PCR could diagnosealmost 60% of acute patients, the specificity of this test was excellent, B. melitensis wasthe causative agent in all patients and all these strains were carrying all substantialvirulence genes. It is concluded that more sensitive PCR kits having lower detection limitare required, and sampling from the patients in appropriate time will increase the efficacyof PCR in the diagnosis of brucellosis.Key Words: Brucella spp., Brucellosis, Serological Tests, PCR, Virulence.