Topraktan izole edilen `Bacillus MB1` in çeşitli mikrobiyolojik ve biyokimyasal özelliklerinin saptanarak bakteriden saflaştırılan subtilizin enziminin özelliklerinin belirlenmesi

Abstract

tu ÖZET Bu çalışmada Diyarbakır, Dicle Üniversitesi kampus alanından yaz koşullarında izole edilen alkalofilik Bacillus MB.1 mikrobiyolojik ve biyokimyasal testlerle tanımlanmaya çalışıldı. Başta tekstil, deri ve deterjan sanayi olmak üzere büyük endüstriyel önemi olan bakterinin salgıladığı subtilizin enzimi birkaç basamakta sataştırılarak biyokimyasal özellikleri, bakterinin üreme ve subtilizin enzimi üretme koşulları belirlendi. İzole edilen mikroorganizma değişik besi ortamlarında üretilerek en iyi enzim üretim ortamı tesbit edilmeye çalışıldı. Mısır nişastası ve soya unu içeren alkali besi ortamının bakteri için ve salgıladığı enzim için en uygun besiyeri olduğu gözlendi. Bu besi ortamında enzim üretimi ve aktivitesinin de yüksek olduğu saptandı. Saflaştırılan enzimin optimum sıcaklığının kalsiyumlu ortamda 62°C kalsiyumsuz ortamda ise 50°C olduğu, optimum pH'sının 11.5 olduğu, Km değerinin 1 x10`3 M olduğu, 3.5 mM PMSF ile tamamıyle inhibe olduğu ayrıca çeşitli maddelerin enzim aktivitesine etkileri incelendi. Ayrıca Triton x-100, Tween 80 ve SDS'nin enzim üzerine etkileri araştırıldı. Triton x-100, Tween 80'in enzimi hiç etkilemediği, %1 oranındaki SDS'nin ise %44 oranında inhibe ettiği saptandı. PAGE ile enzim molekül ağırlığı ~ 27.000 dalton olarak belirlendi.

IV SUMMARY In this study, alkalophilic Bacillus MB.1 was isolated from the soil on Dicle University campus (DİYARBAKIR) during summer. From this microorganism, subtilisin enzyme which was purified following few steps is mainly important at the textile, leather and detergent indutries and its biochemical ptopertieswere studied. The conditions of growth and its subtilisin production were examined. The media for the best growth and subtilisin secretion of bacteria was found to contain corn starch and soyabean meal in this media a high enzyme activity was determined. The various biochemical properties such as temperature, pH, Km and inhibition of this purified enzyme were examined. Moreover, the effect of Triton x-100, Tween 80 and SDS on enzyme activity have been investigated. The results demonstrate that Triton x-100 and Tween 80 do not inhibit the enzyme, while 0.1% SDS inhibit the enzyme activity by 44%. SDS-PAGE analysis of the enzyme shows that it has an apparent molecular size of 27.000 dalton.