Değişik amino asit ve antibiyotiklerin bacillus subtilis amilazlarının membrandaki sentezi ve salgılanması üzerine etkileri ve tripsinin amilaz üzerine olan proteolitik etkisinin incelenmesi

Abstract

2.1. Özet Çermik termal kaplıcalarından saflaştırılıp teşhis edilen Bacillus subtilis'den endüstriyel öneme sahip olan bakteriyel a-amilaz izole edildi. Bazı biyokimyasal özellikleri ve enzim inhibisyonu incelendi. Bakterinin logaritmik büyüme evresi boyunca değişik sürelerde toplanan bakterilerin salgıladığı ve bakteri membranlan izole edilerek, buradan elde edilen, henüz salgılanmamış a-amilaz aktiviteleri tespit edildi. Bacillus subtilis, değişik amino asitlerle ayrı ayrı etkileştirilerek üretildi, gerek salgılanan gerekse membrandaki a-amilaz üretimi üzerine etkileri araştırıldı, a-amilaz üretimini hangi aşamada etkilediği, kullandıkları metabolik yol ve ara metabolitler de göz önüne alınarak araştırıldı. Amino asitlerin membrandan geçişi üzerine olan etkileri; membrandaki ve salgılanmış a-amilaz miktarı kontrol ile kıyaslanarak, hangi amino asitlerin membrandan geçişi kolaylaştırdığı, hangilerinin zorlaştırdığı belirlendi. Ayrıca enzimin oluşum sürecinde, belirlenen zaman diliminde antibiyotik uygulaması ile transkripsiyon ve translasyon aşamasında inhibisyon sağlanarak, membrandaki ve salgılanmış enzim aktivitelerine göre, a-amilazın sentez ve olgun hale geliş sürelerinin, farklı şekilde etki eden antibiyotikler aracılığı ile saptanması gerçekleştirildi. Tripsin etkisine maruz bırakılan a-amilazda meydana gelen değişiklikler belirlendi.

2.2. Summary Bacterial a-amylase, which is of industrial importance, was isolated from Bacillus subtilis, purified and identified from Çermik thermal Springs. Bacteria membranes and secretion of bacteria collected in various periods during logaritmic growth phase of bacteria were also isolated, and a-amylase activities hence obtained and not secreted yet were determined. Bacillus subtilis was produced, being separately interacted with varied amino acids. Its effects on the production of a-amylase both in the membrane and secreted were investigated. In which stage it affected a-amylase production was investigated by taking into consideration metabolic paths and intermadiate metabolits they used. The quantity of a-amylase in the membrane and collected was compared with that of control, and which amino acids eased and which ones made harder the transition through membrane were estabilished. In addition, in the formation process of enzyme, inhibition was obtained in transcription and translation stages through antibiotic administration in defined time intervals, and synthesis and maturation periods of a-amylase according to activities of enzyme in the membrane and secreted were determined by antibiotics affecting differently. The changes occuring in a-amylase exposed to trypsin effect were identified.