Kazein ve K-alt ünitesinin subtilizin ve tripsin için substrat olarak kullanılabilirliğinin karşılaştırılması

Abstract

Ill ÖZET Bu çalışmada inek, koyun, keçi ve manda gibi farklı tür hayvanların sütlerinden saflaştırılan asit kazeinler ve K-kazeinler, B.subtilis türlerinden saflaştırılmış ve ticari olarak temin edilen subtilizin ve tripsin enzimleri için substrat olarak kullanıldı. Asit kazeinler subtilizin için substrat olarak kullanıldıklarında, manda asit kazeinin diğerlerine nazaran daha iyi substrat olduğunu saptandı (A<;6o= 0.622 ve KM= 4.22.1 0`3). K-kazeinler, subtilizin ve tripsin için substrat olarak kullanıldıklarında, düşük Km ve yüksek absorbans değerinin inek k- kazeinine ait olması, hem subtilizin hem de tripsin için daha iyi substrat olduğunu gösterdi. İnek K-kazeini ile hem subtilizin hem de tripsinin maksimum aktivite göstermesi, onun lizin, arginin ve aromatik amino asitlerce daha zengin olduğunu göstermektedir. Hesaplanan C / N oranlarıda bu düşünceyi desteklemektedir. Saflaştırılan dört farklı K-kazeinin subtilizin için, tripsine nazaran daha iyi substrat olması, bu alt ünitelerin Lys ve Arg içeriklerinin, aromatik asit içeriklerinden daha az olduğunu göstermektedir.

IV SUMMARY In this study asit casein and K-caseins were purified from different species of animals milk, such as cow, sheep, goat, and water buffalo. These caseins were used as a substrate for purified preparation and commercially available B.subtilis subtilisin and trypsin. It was established that when acid caseins were used as a substrate for subtilisin, water buffalo acid casein was found to be better substrate for the enzyme compared to other animals milk casein (A$6o - 0.622 and KM = 4.22.10'3). It was found that when K-caseins were used as a substrate for subtilisin and trypsin, cow K-caseins has low Km high absorbance value. This observation showed that cow K-caseins better substrate for both trypsin and subtilisin. Subtilisin and trypsin showed maximum activity with cow K-caseins. These suggest that cow K-caseins has rich contant of lysine, arginine and aromatic amino acids. Calculated C / N ratio is supporting this suggestion. In the case of subtilisin, purified four diffrent caseins were found to be better substrate compared to trypsin. This suggest that these sub-units contain less arginine and lysine compared to aromatic amino acids.