Deneysel Parkinson modelinde bor nitrür nanopartiküllerinin nöroprotektif etkilerinin değerlendirilmesi

Abstract

Parkinson hastalığı (PH) titreme, konuşma bozukluğu, beynin duyarlı bölgelerindeki nöronların kaybı ile karakterize ve dünyada Alzheimer'dan sonra en sık görülen ikinci nörodejeneratif hastalıktır. Son yıllarda yapılan çalışmalar borun insan ve hayvan sağlığı için gerekli bir element olduğunu göster-mektedir. Diğer yandan PH'nn hala kesin olarak tedavisi yapılamamaktadır. Yapılan bu tezde ise anti-oksidan özellikleri, yüksek kararlı kimyasal yapıları ve ilaç taşıyıcı nano boyutlarından dolayı bor nitrür nanopartiküllerinin, MPP+ ile oluşturulan deneysel parkinson modeli üzerindeki nöroprotektif etkileri araştırılmıştır. Tezde, insan embriyonal karsinom Ntera-2 (NT-2) hücre hattı Retinoik Asit (RA) uygula-ması ile nöron benzeri hücrelere dönüştürülmüş ve ardından hücrelere deneysel parkinson modeli oluş-turmak için MPP+ uygulanmıştır. Deneysel parkinson modeline geniş doz aralığında (0,19-100 mg/L) bor nitrür nanopartikülleri uygulanmış ve nanopartiküllerin nöron koruyucu etkinlikleri belirlenmiştir. Hücre-lerdeki canlılık oranlarının belirlenmesi için 3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il) 2,5-difeniltetrazolyum bromid (MTT) ve laktat dehidrogenaz (LDH) testleri uygulanmıştır. Ardından toplam antioksidan kapasite (TAK) ve toplam oksidan seviye (TOS) analizleri ile hücrelerdeki antioksidan ve oksidan değerlerin deği-şimleri hesaplanmıştır. Önemli apoptoz belirteçlerinden olan kromozomal integriteleri belirlemek için hücreler, Hoechst 33258 floresan boyama metodu kullanılarak mikroskop altında analiz edilmiştir. Bor nitrür nanopartiküllerin hücrelerdeki asetilkolinesteraz (AChE) aktivitesi üzerine olan etkileri AChE kolo-rimetrik testi ile belirlenmiştir. Son olarak hücrelerin ölüm yolakları akış sitometrisi kullanılarak ortaya konulmuştur. Sonuçlar, bor nitrür nanopartiküllerinin hücreler üzerinde belirli dozlarda herhangi bir toksik etkiye sebep olmadığını göstermiştir. Bor nitrür nanopartikül uygulaması deneysel parkinson modelinde MPP+ toksisitesinin neden olduğu oksidatif stresi azalttığı fakat AChE seviyelerinde herhangi bir etkiye neden olmadığı belirlenmiştir. Akış sitometrisi analizi de bor nitrür nanopartikül uygulamasının deneysel parkinson modelinde canlılığı arttırdığını göstermiştir.

Parkinson disease (PD) is characterized by shaking, speech disturbance, loss of neurons in sensi-tive areas of brain and the second most common neurodegenerative disorder after Alzheimer's disease in world. Boron is require element for health of human and animal. It is still not possible to fully treat PH. In this thesis, neuroprotective effects of boron nitride nanoparticles were investigated due to their antioxi-dant effects, high chemical stability and nanoscale of them to drug delivery on experimental parkinson model which composing with MPP+. In the study, human pluripotent embryonal carcinoma Ntera-2 (NT-2) cell line was trans differentiated like a neuron cell with Retinoic acid (RA) then differentiated cells were treated with MPP+ to create experimental parkinson model. Boron nitride nanoparticles were applied to experimental parkinson model in wide dose range (0,19-100 mg/L) then neuroprotective efficacy of nanoparticles was determined. To determine the viability of cells, 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl) 2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and lactate dehydrogenase (LDH) tests were performed. Then, analysis of the changes in the antioxidant and oxidant values in cells were calculated with total antioxi-dant capacity (TAC) and total oxidant level (TOS) tests. Cells were analyzed under the microscope using the Hoechst 33258 fluorescence staining method to determine chromosomal integrities which are impor-tant markers of apoptosis. The effects of boron nitride nanoparticles on acetylcholinesterase (AChE) activity in cells were determined by AChE colorimetric test. Finally, death pathways of the cells were determined using flow cytometry. As a result, it was shown that boron nitride nanoparticles do not cause toxic effect at spesific doses on cells. Boron nitride nanoparticle application in experimental parkinson model reduced the oxidative stress caused by MPP + toxicity but did not cause any effect on AChE le-vels. Flow cytometry analysis also showed that application of boron nitride nanoparticle increased viabi-lity of cells in parkinson model.