Diabetik ve diabetik olmayan ratlarda propolisin aktif bileşenlerinden kafeik asit fenetil ester ve tıbbi bitki ekstresi olan ankaferd blood stopper uygulamasının sekonder yara iyileşmesi üzerine etkisinin değerlendirilmesi

Abstract

Bu çalışmanın amacı, Ankaferd Blood Stopper'ın (ABS) ve kafeik asit fenetil ester (CAPE) 'in ağız içi mukozal yara iyileşme sürecindeki etkileri araştırmaktır.Çalışmada ortalama ağırlıkları 250-300 gr olan 126 adet erkek wistar rat kullanıldı. Ratlar rastgele 6 gruba ayrıldı: Diabet olmayan ABS grubu, Diabet olmayan CAPE grubu, diabet olmayan kontrol grubu, diabetik ABS grubu, diabetik CAPE grubu, diabetik kontrol grubu. Ratların genel anestezisi intra-muskuler ketamin (8 mg/100g) ile sağlandı. Molar dişleri arasında kalan damak mukoperiosteumunda 4 mm'lik 'punch' biyopsi aleti kullanılarak tam kalınlık eksizyonel yara oluşturuldu. Sağlıklı 63 rat streptozotosin (STZ) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) 50 mg/kg in 0.2 ml 10 mM sitrat çözeltisi ile intraperitonel enjeksiyon yapıldı. Bir hafta sonra, ratların kan glikoz değeri ≥250mg/dl ise ratlar diabetik olarak düşünüldü. Eksizyonel yara bölgelerine ABS gruplarına topikal olarak 0.1 ml ABS, CAPE gruplarına 100 mmol/kg CAPE maddesi, kontrol gruplarına ise serum fizyolojik uygulanmıştır. Bütün gruplar histolojik ve biyokimyasal analiz grubu olarak alt gruplara ayrılmıştır. Her gruptan eşit sayıda hayvan 7, 14 ve 21. günlerde sakrifiye edilmiştir. Histolojik analizin yapıldığı gruplara ait yara dokularının hematoksilen eozin ile boyanmalarından sonra mikroskobik olarak incelemesi yapılmıştır. Biyokimyasal analizin yapıldığı gruplara ait yara dokularında ise western blot yöntemi ile VEGF, TSG-6 protein düzeyleri belirlenmiştir.Diabet olmayan grupta 7. gün CAPE grubunda inflamasyonda ve damar dilatasyonu ve hemorajide kontrol grubuna göre anlamlı bir şekilde azalmıştır (p˂0,05). Diabet olmayan 14. günde kontrol grubu ile ABS grubu arasındaki karşılaştırmada fibroziste artış meydana gelmiş ve istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmuştur (p˂0,05). Diabetik 7 , 14 ve 21. günde hem ABS hem de CAPE grubunda damar dilastasyonu ve hemorajide kontrol grubuna göre anlamlı bir şekilde azalmıştır (p˂0,05). Diabetsiz ratlarda VEGF ekspresyonu Cape 21. gün ve ABS 7. günde artmıştır. Diabetsiz ratlarda TSG-6 ekspresyonu Cape 7. günde ve ABS 21. günde artmıştır. Diabetli ratların ise; VEGF ekspresyonu ABS 7. gün, CAPE 14. gün ve ABS 21. günde artış olduğu gözlemlenmiştir. ABS 7.günde TSG-6 ekspresyonunda bir artış gözlemlenmiştir.Çalışmamızda, ABS ve CAPE'nin diabetik ve diabetik olmayan ratlarda yara iyileşmesi sürecindeki etkileri histolojik ve biyokimyasal yöntemler kullanılarak test edilmiştir. Elde edilen veriler doğrultusunda, ABS ve CAPE'nin yara iyileşme sürecinde olumlu etkileri olduğu sonucuna varılmıştır.

The purpose of this study is to investigate the effect of Ankaferd Blood Stopper (ABS) and caffeic acid phenethyl ester (CAPE) on oral secondary wound healing. A total of 126 male Wistar rats, weighing 250-300 g in average, were used in the study. Rats were randomly divided into six group: Non-diabetic ABS group, non-diabetic CAPE group, non-diabetic control group,diabetic ABS group, diabetic CAPE group, diabetic control group. General anaesthesia of the rats were conducted with intra-muscular ketamine (8 mg/100g). In their muco-periosteum that are between molar teeth, a full thickness excisional wound was created by using a 4 mm 'punch' biopsy tool. Healthy 63 rats were intraperitoneally injected with Streptozotocin (STZ) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) 50 mg/kg in 0.2 ml 10 m citrate solution. After a week, if the blood glucose value of the rat are ≥250mg/dl, the rats are considered to be diabetic. 0.1 ml topical ABS was applied to ABS groups, 100mmol/kg topical CAPE application was applied to CAPE groups and saline application was applied to control groups. Each group were divided into subgroups as a histologic and a biochemical analyze group. Seven animals from each group were sacrificed at 7, 14 and 21 days. The palatal specimens were stained with hemotoxylin and eosin to measure the mean wound depth and width. VEGF and TSG-6 protein expression were determined by western blot method. The results of the statistical analysis determined the Inflammation and vessel dilatation and hemorrhage to be significantly lower in the non-diabetic CAPE group than the control group at 7 day (p<0.05). The results of the statistical analysis determined the fibrosis to be significantly higher in the non-diabetic ABS group than the control group at 14 day (p<0.05). The results of the statistical analysis determined the vessel dilatation and hemorrhage to be significantly lower in the diabetic ABS and CAPE group than the control group at 7, 14, 21. day (p<0.05).When the VEGF protein levels were compared, an increase was found non-diabetic CAPE 21. day and non-diabetic ABS 7. day. Expression of TSG-6 increased in the 7th day of the Cape and 21 days of the ABS in non-diabetic rats. VEGF expression was increased on ABS 7th day, CAPE 14th day and ABS 21th day. Expression of TSG-6 increased in the 7th day of the Cape in diabetic rats.In the present study, the effect of ABS and CAPE on wound healing process were tested using histological and biochemical methods in diabetic and non-diabetic rats. Within the results of obtained data, it is concluded that ABS and CAPE has positive effect on wound healing process.