Sülforafanın 769-P insan böbrek kanser hücre dizisinde apoptoz üzerine etkisi ve hücre migrasyonunun inhibisyonu

Abstract

Kanser görülme sıklığı dünyada giderek artmaktadır. Sağlıklı hücrelerde meydanagelen fenotipik ve genotipik değişiklikler sonucunda kanser meydana gelmektedir.Kontrolsüz hücre proliferasyonu sebebiyle hücreler anormal şekilde çoğalarakinvazyon ve metastaz özelliği kazanırlar. Böbrekler metabolizma tarafından üretilenartık maddelerin vücuttan uzaklaştırılmasında ve homeostazın sağlanmasında önemlifonksiyonlara sahiptir. Böbrek kanseri; ürogenital kanserler içerisinde yer almakta veinsidansı gittikçe artmaktadır.Son yıllarda bitkisel kaynaklı besinlere olan ilgi artmaktadır ve geleneksel tedavileridesteklemek amacıyla sıklıkla tercih edilmektedir. Tarih boyunca da tedavilerdebitkisel gıdalar kullanılmış olup biyoaktif bileşenlerin aynı zamanda kanserinönlenmesinde farmakolojik ve fizyolojik etkilerinin olduğu savunulmaktadır. Diyetlealınan besinlerdeki kemopreventif bileşikler; hücre içi sinyal iletim yolaklarınıdüzenleme veya kanser oluşum sürecini uzatarak çeşitli koruyucu etkiler meydanagetirmektedir.Brokoli, karnabahar, beyaz ve karalahana, Brüksel lahanası gibi Brassicaceae olarakda bilinen turpgiller ailesindeki sebzeler 'glukosinolat ' adı verilen bileşik içerirler.Glukosinolatlar, mirosinaz enzimi tarafından katalizlenen reaksiyona girerler.Parçalanma ürünü ise izotiyosiyanatın karakteristik bir bileşiği sülforafan (SFN)'dır.SFN kemopreventif etkileri sayesinde son yıllarda büyük ilgi görmektedir.Çok sayıda epidemiyolojik araştırmalar ile in vivo ve in vitro çalışmalar, SFN'ninkanseri önleyici ya da riskini azaltıcı potansiyeli olduğunu belirlemiştir. SFN'ninçeşitli hücre hatları üzerindeki proapoptotik etkileri tanımlanmıştır fakat literatürdeböbrek kanserinde apoptoz üzerine olan etkisi için yeterli çalışma bulunmamaktadır.Bu çalışmada SFN'nin 769-P insan böbrek kanser hücre hattı üzerindeki etkisiaraştırılmış ve kontrol grubu olarak 293-T insan böbrek epitel hücre hattıkullanılmıştır. Bu amaçla çeşitli SFN konsantrasyonları hazırlanmış ve hücre hatlarıüzerinde etkileri incelenmiştir. Hücre proliferasyonu üzerine etkisinin gözlenmesi içinMTT [3-(4, 5-dimetil tiyazol-2-il)-2, 5 difenil tetrazolyum bromid] testi (24. ,48. ,72.saat) ve sitotoksik etkinin belirlenebilmesi için LDH (Laktat dehidrogeneaz) testiuygulanmıştır. Analizler sonucu seçilen konsantrasyonlarda hücre döngüsüinhibisyonları saptanmıştır. SFN'nin hücrelerde meydana getirdiği apoptotik etkininbelirlenebilmesi için erken ve geç apoptotik hücreler Anneksin V yöntemi ile analizedilmiştir. 769-P insan böbrek kanser hücre hattında ise doza bağımlı şekilde hücremigrasyonunun inhibisyonu incelenmiştir.

The frequency of cancer falls in the World and it occurs in phenotypic and genotypicconditions that occur in healthy cells. Because of uncontrolled cell proliferation, cellsgain abnormalities and gain invasion and metastasis. Kidneys have factors related tometabolism and homeostasis is sufficient. Kidney cancer; urogenital cancers areinvolved and the incidence is increasing.In recent years, interest in plant-derived foods has increased and is often preferred tosupport traditional treatments. Throughout history, plant foods have been used in thetreatment and bioactive components are also claimed to have pharmacological andphysiological effects in the prevention of cancer. Chemopreventive compounds indietary foods; by modulating the intracellular signal transduction pathways orprolonging the cancer formation process.Broccoli, cauliflower, white and black cabbage, Brussels sprouts such as Brassicaceaevegetables contain in the compound called glucosinolate. Glucosinolates react bycatalyzing the enzyme myosinase. The disintegration product is a characteristiccompound of isothiocyanate, sulforaphane (SFN). Due to its chemopreventive effects,SFN has received great interest in recent years.In vivo and in vitro studies with numerous epidemiological investigations haveidentified the potential of SFN to prevent or reduce cancer. The proapoptotic effectsof SFN on various cell lines have been described, but there is insufficient study in theliterature on the effect of apoptosis on kidney cancer. In this study, the effect of SFNon 769-P human kidney cancer cell line was investigated and 293-T human renalepithelial cell line was used as control group. Various SFN concentrations wereprepared for this purpose and the effects on cell lines were examined.MTT [3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide] test (24, 48, and 72 hours)and LDH (Lactate dehydrogenease) for the detection of cytotoxic effect on cellproliferation test was applied. Cell cycle inhibitions were determined at the selectedconcentrations. In order to determine the apoptotic effect of SFN in cells, early andlate apoptotic cells were analyzed by Annexin V method. In the 769-P human kidneycancer cell line, inhibition of cell migration in a dose-dependent manner wasinvestigated.