Orta Karadeniz Bölgesinde bulunan culex pipiens kompleks türlerinin moleküler olarak belirlenmesi

Abstract

Yapılan bu tez çalışmasında Orta Karadeniz Bölgesi'nde yayılım gösteren Culex pipiens tür kompleksinin belirlenmesi amacıyla 2014-2016 yılları mayıs eylül ayları arasında 14 noktadan örneklem yapılmıştır. Culex pipiens tür kompleksinde morfolojik tür teşhisinin problemlerinden dolayı türlerin statülerinin moleküler olarak belirlenmesi amacıyla Ace-2 gen bölgesinin bir kısmı çoğaltılmıştır. Alanda yoğun olarak yayılan Culex pipiens varyetelerinin belirlenmesi amacıyla CQ11 bölgesi çoğaltılarak moleküler teşhisleri yapılmaya çalışılmıştır. Morfolojik olarak kompleks üyesi olarak tanımlanan örnekler moleküler çalışmalarda kullanılmıştır. PZR reaksiyonu sonucunda elde edilen amplikonlar dizileme işlemine tabi tutulmuştur. Dizi verileri kromotogramları incelendikten sonra Mega7 programı yardımıyla hizalanmış ve gen banktan alınan örneklerde eklenerek filogenetik ağaçlar çizilmiştir. Elde edilen verilere göre alanda sadece Culex pipiens türü olduğu ve bunun iki varyetesinin dağılım gösterdiği (Culex pipiens pipiens ve Culex pipiens f molestus) belirlenmiştir. Ülkemizde varlığı bilinen ve son dönemde moleküler olarak doğrulana Culex pipiens quinquefascitus ve bu kompleksin ikiz türü olan Culex torrentium örneklerine çalışma alanında rastlanmamıştır. Çizilen UPGMA ağacı Samsun Horhor deresinde sadece Culex pipiens f molestus varyetesinin varlığı göstermiştir. Amasya, Bafra, Giresun, Çarşamba, Ordu Ünye bölgelerinde her iki varyeteninde var olduğu ve diğer bölgelerde ise sadece Cx. pipiens pipiens varyetesinin varlığı belirlenmiştir. Gen bank örnekleri ile karşılaştırma sonucunda örneklerimizin KM922631.1 nolu Culex pipiens pipiens örneğiyle yüksek oranda uyuştuğu belirlenmiştir. Çizilen ağaçta Culex pipiens quinquefasciatus genbank örneğiyle ile olan uzaklığının Culex pipiens pallens'ten daha az olduğu ve en uzak türün Culex torrentium olduğu belirlenmiştir.

In this thesis, sampling was performed form 14 points between May and September 2014-2016 in order to determine the Culex pipiens species complex which is spreading in the Middle Black Sea Region. A part of the Ace-2 gene region had been amplified in order to determine the species status related to the morphological identification problems in the Culex pipiens species complex. The CQ11 region was reproduced and molecular diagnostics were attempted for determining Culex pipiens varieties which are heavily distributed in the field. The morphologically identified complex members had been used in molecular studies. The amplicons obtained as a result of the PCR reaction were subjected to the sequencing process. Sequence chromotograms were examined and then aligned with Mega7 program and phylogenetic trees were drawn by adding them to the samples taken from the gene bank. According to the obtained data, it was determined just only Culex pipiens species in the area and two varieties of Culex pipiens (Culex pipiens and Culex pipiens f molestus) distribution. Culex pipiens quinquefascitus, which is known to exist in our country and has recently been molecularly confirmed, and Culex torrentium, the twin species of this complex, have not been found in the study area. The drawn UPGMA tree only showed the presence of Culex pipiens f molestus variety at the Samsun Horhor stream. It has been identified each two varieties were exist in Amasya, Bafra, Giresun, Çarşamba, Ordu Ünye and only the presence of the Cx. pipiens pipiens variety in the other regions. As a result of comparison with the gene bank samples, It was found that our samples highly overlapped with KM922631.1 Culex pipiens samples. Culex pipiens quinquefasciatus Gene Bank sample was found to be less distant from Culex pipiens pallens Gen Bank sample, and Culex torrentium was found to be the most distant species.