MRUBY3` e ait genin pTolT plazmitine klonlanması, ekspresyonu ve floresan proteinin karakterizasyonu

Abstract

İnsanlığın varoluşundan günümüze dek ışık yayan maddeler ilgi oluşturmuş, insanlık merakını gidermek için bu maddeler üzerinde yoğunlaşmıştır. Varlık sebebini sorgulamasının yanı sıra bu malzemeleri günlük hayatında kullanmanın yollarını aramış, her madde için uygun yollar bularak hem görsel amaçla hem de hayatının kolaylaştırılması amacıyla maddeleri kullanmaya başlamıştır. Bu maddeler içinde insanlığın ilgisini çeken en ilginç olanları elbette ki biyolüminesans materyal içeren malzemeler olmuştur. Bir ateş böceğinin parlaması, mercan resiflerinin veya balığın bünyesinde barındırdığı cezbedici ışığın, sebebine giderek ilgi ile yaklaşılmış, bu renk âleminin sebebinin yanı sıra bu maddelerin günlük hayatta kullanım alanları ile ilgili araştırmalar yapmaya ve bu maddeler için kullanım alanlarını sorgulamaya başlamıştır. Özellikle biyoteknolojik gelişmeler eşsiz bir dünyanın kapısını aralamış, bir denizanası bünyesinde başlayan macera farklı yörüngelerde ve farklı amaçlarla kullanıma açılmıştır. Görüntüleme tekniklerinin gelişmesi ve daha ileriye taşınmasında rekombinant moleküllerle daha ileri bir katkı sağlanacağı elbette ki göz ardı edilemez. Yaptığımız çalışma ile mRuby3 floresans proteinin pTolT plazmid vektörüne klonlanması, transformasyonu gerçekleştirilmiş ve doğrulama analizleri yapılmıştır. Çalışma sonucunda UV spektrofometrede üretilen proteinler için ölçüm yapılmış, emisyon ve eksitasyon değerleri sırasıyla 559,2 ile 592,4 olarak bulunmuştur. Stokes kayması 33,2 olarak kayıt edilmiştir. Güçlü bir stokes kaymasına sahip olan mRuby3 doku ve organel görüntüleme teknolojilerinde kullanımına bu sayede önemli bir katkı sağlanacağı düşünülmektedir

From the existence of human beings to the present day, the light-emitting substances have focused on these substances in order to satisfy the curiosity of humanity. In addition to questioning the reason of existence, humanity looked for ways to use these materials from his daily life, finding suitable ways for each substance, and using the ingredients in his life both for visual purposes and for making his life easier.Among these substances, the most interesting these of interest to humanity are of course the materials containing bioluminescence materials. The glow of a firefly, in the pursuit of the enthralling light contained in the coral reefs or the fish, has been approached with interest and began to do researches about the uses of these substances from their daily life and the areas of use for these substances. Especially biotechnological developments have opened the door of a unique world, the adventure started within a jellyfish and has been opened for different purposes in different orbits. Of course it cannot be ignored that further development of imaging techniques and further development of clone molecules will be made. In our study, cloning of mRuby3 fluorescence protein gene into the pTolT vector was carried out and transformation analysis was performed. As a result of the study, the measurements were made for the proteins produced in the UV spectrophotometer and the emission and excitation values were found to be 559.2 and 592.4, respectively. stokes shift was recorded as 33.2. mRuby3 has a strong stockes shift and will make a significant contribution to its use in tissue and organelle imaging technologies.