İneklerde erken gebelik tanısında fassisi bovipreg test kitinin tam kan ve kan serumunda etkinliğinin araştırılması

Abstract

Bu araştırmada Türkiye'de ilk defa saha koşullarında, ineklerde gebeliğin 30. ve 50 günlerinde, gebelik tanısı amacıyla ELISA ve RIA yöntemleri kullanılmadan, tam kan ve kan serumunda erken gebelik spesifik proteinin (PAG) göstergesi olan Fassisi®BoviPreg test kitinin etkinliğini ortaya koymak amaçlandı. Sunulan araştırma Kars ilinde suni tohumlama tarihleri kayıtlı olan 50 baş inekte yapıldı. Suni tohumlamadan 30 ve 50 gün sonra heparinli ve boş tüplere serum ve tam kan için vena cocygeadan kan örnekleri alındı. Bu uygulamalardan hemen sonra transrektal ultrasonografi (Sonosite Titan®, Sonosite, USA) ile gebelik durumları kontrol edildi. Alınan tam kanda hemen saha koşulunda 15-30°C olan bir ortamda gebelik tanısı için Fassisi®BoviPreg Test Kiti (Fassisi, Goettingen, Germany) uygulaması üretici firmanın belirttiği şekilde yapıldı. Boş tüplere alınan kanlar 3000 devirde 10 dakika santrifüj edildi. Serumlar mikrosantrifüj tüplerine aktarıldı ve progesteron ölçümleri yapılıncaya kadar -20°C'de depolandı. Aynı zamanda elde edilen serumlarda Fassisi®BoviPreg Test Kiti uygulamalarıyla gebelik durumları tespit edildi. Hem serum hem de tam kanda gebelik durumları gebe, gebe değil şeklinde tespit edildi. Kan serumlarında; progesteron düzeyi analizi özel bir laboratuvarda Electrochemiluminescent Immunoassay (ECLIA) yöntemi ile Test Roche E170 analizatöründe gerçekleştirildi. Çalışmada sensitivite, spesifite, pozitif tanımlama, negatif tanımlama ve doğruluk oranı gibi parametreler belirlendi. Transrektal ultrasonografi 30. gün yapılan gebelik muayenesinde %52 oranında gebelik tespit edildi (26/50). İneklerde 30. gün yapılan testte serum ve tam kandaki sırasıyla sensitivite oranları %61,54 ve %50,0, spesifite oranı %79,17 ve %75,0, doğruluk oranı %70,0 ve %62,0 pozitif tanımlama %76,2 ve %68,4, negatif tanımlama %65,5 ve %58,1, yanlış pozitif %23,8 ve %31,6, yanlış negatif %34,5 ve %41,9 olarak belirlendi. Ellinci günde ise serum ve tam kanda sırasıyla sensitivite %63,64 ve %50,0, spesifite oranı ise hem serum hem de tam kanda %100,0, doğruluk oranı %75,0 ve ve %65,62 olarak tespit edildi. Gebe ineklerdeki progesteron düzeyi ortalama 8,3±3,5 ng/mL iken gebe olmayan ineklerde 2,5±3,1 ng/mL tespit edildi (P<0,001). Otuzuncu gün serum progesteron düzeyi 5 ng/mL'den yüksek olanlarda Fassisi®BoviPreg Test kiti uygulamaları ile daha yüksek gebelik oranlarına ulaşıldı (P<0,001). Simental ineklerin serumunda sensitivite oranlarının Brown Swiss ırkı ineklere göre daha yüksek olduğu belirlendi. Otuzuncu gün vücut kondüsyon skoru (VKS) 3 ve üzerinde olanlarda serumunda sensitivite oranı %83,33 ve VKS 3'ün altında olanlarda ise %12,50 olarak tespit edildi. Ellinci gün yapılan ultrasonografik görüntülemede %15,4 oranında embriyonik ölüm tespit edildi.Sonuç olarak; ineklerde gebeliğin 30 ve 50. günlerinde, gebelik tanısı amacıyla kullanılan Fassisi®BoviPreg test kitinden elde edilen bulgulara göre kan serumunda bu testi uygulamanın tam kana göre daha faydalı olabileceği ve 50. gün hem tam kan hem de serum spesifite değerinin en güvenilir gösterge olduğu kanısına varıldı. Erken gebeliklerin tespitinde kullanılan Fassisi®BoviPreg test kiti ile ilgili daha detaylı çalışmaların yapılmasına ihtiyaç vardır.

In this study, it was aimed to primarily reveal efficacy of Fassisi®BoviPreg test kit, determining early pregnancy specific glycoprotein (PAG) from whole blood and blood serum at day 30 and 50 of pregnancies in cows, instead of conventional usage of ELISA and RIA methods, in Turkey's field condition. Presented study was carried out on 50 head cows, whose artificial insemination dates had been recorded. Blood samples from vena cocygea were collected in sampling tubes containing heparin to obtain whole blood and serum on days 30 and 50 following AI. Pregnancies were controlled with transrectal ultrasonography (Sonosite Titan, Sonosite, USA) immediately after blood sampling. Application of Fassisi®BoviPreg Test Kit (Fassisi, Goettingen, Germany) were carried out according to instruction of producer with collected whole blood in field condition at 15-30°C ambient air temperature. Blood in sampling tubes were centrifuged at 3000 rpm for 10 min to obtain serum samples. Then, serum samples were transferred to micro-centrifuge tubes and stored at -20°C until progesterone measurements. Serum samples were simultaneously used to determine pregnancy condition with Fassisi®BoviPreg Test Kit. Pregnancy conditions of animals were determined as pregnant or not pregnant from whole blood and serum. Progesterone levels in serum samples were analyzed with Electrochemiluminescent Immunoassay (ECLIA) method in a special biochemical laboratory. Sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and accuracy ratios etc. were determined in current study. Fifty two percent pregnancy rate (26/50) was determined with transrectal ultrasonography at day 30 in current study. Parameters at day 30 were determined as following: sensitivity rates were 61.54 and 50.0%; specificity rates were 79.17 and 75%; accuracy rates were 70.0 and 62.0%; positive predictive values were 76.2 and 68.4%; negative predictive values were 65.5 and 58.1%; incorrect positive diagnoses were 23.8 and 31.6%; incorrect negative diagnoses were 34.5 and 41.9% in serum and whole blood samples, respectively. Sensitivities were 63.64 and 50.0%, specificities were 100.0% in both, accuracies were 75.0 and 65.62% in serum and whole blood at day 50th of pregnancy, respectively. While mean progesterone level in pregnant cows was 8.3±3.5 ng/mL, it was determined as 2.5±3.1 ng/mL in non-pregnant cows (P<0.001). Higher pregnancy rates were obtained with Fassisi®BoviPreg Test kit in cows with 5 ng/mL and higher progesterone levels (P<0.001). It was determined that sensitivity rates from serum in Simmental cows were higher than those in Brown Swiss cows. While, serum sensitivity rate was 83.33% in cows with 3 and higher body condition score (BCS), this were determined as 12.5% in cows with BCS lower than 3. Embryonic lost were determined as 15.4% with USG examination at day 50. In conclusion, results obtained from Fassisi®BoviPreg test kit at day 30rd and 50th of pregnancy in cows showed that usage of blood serum in this kit is more accurate and beneficial instead of usage of whole blood. Moreover, it was concluded that specificity is more confidential at day 50th. It is needed to carry out new and future studies related with Fassisi®BoviPreg test kit, used for determination of early pregnancy.