Kağızman cevizinden (Juglans regia L.) lipazın saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışmada Kağızman cevizinden (Juglans regia L) lipazın saflaştırılması ve karakterizasyonunun yapılması amaçlanmıştır. Kağızman cevizi için yapılan yağ uzaklaştırma işleminin ardından amonyum sülfatla çöktürme, diyaliz ve jel filtrasyon yöntemleri kullanılarak lipaz yaklaşık olarak 3,53 kat saflaştırıldı. Yapılan her aşama sonrasında Lowry yöntemiyle protein tayini yapıldı. Bu işlemin ardından ise spektrofotometrik olarak aktivite ölçümü yapıldı. Saflaştırılan lipaz enziminin optimum pH'sının 9,5 ve optimum sıcaklığı 40 ̊C olarak molekül kütlesi ise yaklaşık olarak 67,6 kDa belirlendi. Lipaz enzimi için optimum iyonik şiddet 900 mM ve glisin 9,5 tamponu olarak belirlendi. Substrat olarak p-nitrofenil oktanoat ve p-nitrofenil bütirat kullanılarak Km ve Vmaks değerleri hesaplandı. Km değeri p-nitrofenil oktanoat için 0,21 mM, ve p-nitrofenil bütirat için 0,0558 mM olmakla beraber Vmaks değeri p-nitrofenil oktanoat için 1.3 U/mg ve p-nitrofenil bütirat için ise 0,46 U/mg olarak ortaya konuldu. Sonuç olarak Kağızman cevizinden (Juglans regia L.) saflaştırılan lipazın optimum pH, optimum sıcaklık, iyonik şiddet, molekül kütlesi gibi parametreleri incelendi. İncelenen bu parametrelerin lipaz içeren diğer bitkisel kökenli türlerden faklı olduğu belirlendi.

The aim of this study was to purification and characterization of lipase enzyme from Kağızman walnut (Juglans regia L). After removal of oil from walnut, approximately 3,53 times purification was performed by precipitation with ammonium sulfate, dialysis and gel filtration techniques. After each step protein analysis was conducted by Lowry method. Then, activity analysis was done spectrophotometrically. The optimum pH and temperature of purified lipase enzyme were obtained as 9,5 and 40 ̊C, respectively. In addition, molecular mass was calculated about 67,6 kDa. The ionic strength of lipase enzyme was observed as 9,5 and 900 mM and it was determined as glycine tampon. Km and Vmax values were calculated by using p-nitrophenyl octanoate and p-nitrophenyl butyrate as substrates. While Km values for p-nitrophenyl octanoate and p-nitrophenyl butyrate were obtained as 0,21 mM and 0,0558 mM, Vmax values for p-nitrophenyl octanoate and p-nitrophenyl butyrate were calculated as 1,3 U/mg and 0,46 U/mg, respectively. Consequently, optimum pH, optimum temperature, ionic strength, molecular mass of lipase which was obtained from Kağızman walnut (Juglans regia L.). It was determined that these parameters were different from other species with vegetal origin which contain lipase.