Termofilik Bacillus licheniformis bakterisinden β - galaktosidaz enzim üretimi

Abstract

Bu çalışmada; Bölgemizde bulunan sıcak su kaynaklarından toplanan Bacillus Licheniformis bakterisinden, β - Galaktozidazın termal kaynaklı olmasının ticari olarak daha geniĢ uygulama alanları sağlayabileceğinden, özellikle termofilik olarak üretilmesi hedeflenmiĢtir. Çalışma yapılırken bölgede bulunan su kaynaklarından alınan termofilikbakteriler izole edilerek karakteristik özellikleri belirlenmiştir Su kaynaklarından termofilik bakteriler izole edilmiştir. İzole edilen örneklerin çeşitli karakteristik özellikleri belirlenmiştir. Saflaştırılan DNA‟lardan 16s rDNA bölgeleri PCR ile saflaştırılmış ve sekans analizleri yapılmıştır. Bacillus Licheniformis bakterisine ait β –Galaktozidaz enzimini ifade eden gen bölgeleri biyoinformatik analiz yöntemleri ile saptanmıştır. Nikel affinitesi ile 6X-His takısına sahip rekombinant proteinlerin saflaĢtırılması gerçekleştirilmiĢtir. Bu sebeple, termal kaynaklardan elde edilen Termofilik Bacillus Licheniformis bakterisinden β-Galaktozidaz enzimin, E.coli‟ye klonlanarak rekombinant olarak üretilmesi ve saflaştırılması sağlanmıştır.

In this study; Since the thermal source of β - galactosidase from Bacillus licheniformis bacteria collected from the hot water springs in our region can provide commercially wider application areas, it is aimed to be produced as thermophilic. Thermophilic bacteria were isolated from water sources. Various characteristics of isolated sampleswere determined. The 16s rDNA regions from the purified DNA were purified by PCR and sequenced. Purification of recombinant proteins having the 6X-His tag with nickel affinity was performed. For this reason, β-Galactosidase enzyme from Thermophilic Bacillus Licheniformis bacterium obtained from thermal sources has been cloned into E.coli to produce recombinant production and purification.