Deneysel iskemi-reperfüzyon oluşturulmuş sıçan retinasında apoptozisin incelenmesi

Abstract

Bu çalışma, çeşitli antioksidanların, sıçan retinasında iskemi-reperfüzyon (İ-R) sırasında oluşan serbestoksijen radikallerine karşı muhtemel rolünü göstermektedir. Hayvanlar rast gele seçilerek sekiz gruba ayrıldı.Bunlar 1. grup (kontrol), 2. grup (İ-R), 3. grup (İ-R + Trigonella foenum-graecum), 4. grup ((İ-R+ Cyperusrotundus ), 5. grup (Thymus longicaulis), 6. grup (Fumaria asepala Boiss.), 7. grup (Lutein) ve 8. grup(Salisilaldimin) olarak adlandırıldı. Deneyde sıçanların sağ gözleri iskemi-reperfüzyon için kullanıldı. 3-8.gruplara iskemi başlamadan 6 saat öncesinden ve reperfüzyonda altışar saat aralıklarla Trigonella, Cyperus,Thymus, Fumaria ekstraktı, lutein ve salisilaldimin verildi. 24 saatlik reperfüzyondan sonra hayvanlar kesildi.Daha sonra retinalar, malondialdehit (MDA) ve glutatyon (GSH) ölçümü için izole edildi. Bu deney sonucunda,tüm grupların lipid peroksidasyonunu, iskemi grubuna göre koruduğu saptanırken, salisilaldimin (2.92nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı) grubunun MDA değeri kontrol (2.82 nmol/100 mg retina doku yaşağırlığı) grubuna en yakın değere sahip olduğu görüldü. Buna göre, salisilaldiminin (2.92 nmol/100 mg retinadoku yaş ağırlığı) Luteinden (3.55 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı), Luteinin, Fumaria' dan (4.95nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı), Fumaria'nın Cyperus'tan (5.59 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı),Cyperus'un Thymus'tan (9.16nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı), Thymus'un Trigonella'dan (10.46 nmol/100mg retina doku yaş ağırlığı) daha iyi koruma sağladığı görülmüştür. GSH miktarları değerlendirildiğinde kontrolgrubuna (2.3 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı) en yakın değerin Fumaria grubunda (2.2 nmol/100 mg retinadoku yaş ağırlığı) olduğu görülmüştür. Buna göre Fumaria grubundaki GSH miktarı (2.2 nmol/100 mg retinadoku yaş ağırlığı) salisilaldiminden (2.1 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı), salisilaldiminin Trigonella veCyperus'tan'dan (1.9 nmol/100 mg retina doku yaş ağırlığı), Trigonella ve Cyperus'un Luteinden (1.8 nmol/100mg retina doku yaş ağırlığı) daha yüksek olarak bulunmuştur. Sonuç olarak kullanılan antioksidanlarınperoksidasyon ürünü olan MDA oluşumunu engellediği ve bir antioksidan olan GSH miktarını koruduğu tespitedilmiştir.Buna ilave olarak iskemi-reperfüzyon sonucunda oluşan apoptozisden birinci derecede sorumlu kaspaz-3 proteini SDS-PAGE ve immünoblot teknikleri ile incelenmiştir. İmmunoblot sonuçları Fluor-S-Multi-Imagerile taranarak gruplar arasındaki farklılıklar tespit edilmiştir. Elde edilen bu sonuçlara göre, kullanılanantioksidanların özellikle de salisilaldiminin gözde oluşan I/R hasarlarına karşı klinik amaçlı kullanılabileceğikanaati ortaya çıkmaktadır.ANAHTAR KELİMELER : İskemi-reperfüzyon, retina, MDA, GSH, apoptozis, kaspaz 3

This study shows the possible role of various antioxidants on free oxygen radicals which formed duringischemia-reperfusion (I-R) in rat retina. The animals, randomly selected, were divided into eight groups. Thesewere named as group 1 (control), group 2 (I-R), group 3 (I-R+ Trigonella), group 4 (I-R+Cyperus), group 5 (I-R+Thymus), group 6 (I-R+ Fumaria), group 7 (I-R + Lutein), group 8 (I-R + Salisilaldimin). In the experiment,right eyes of rats were used for ischemia-reperfusion. Groups 3-8 received, Trigonella, Cyperus, Thymus,Fumaria extract, lutein and salisilaldimin before 6 hours of ischemia and after 6 hours of reperfusionrespectively. The animals were sacrificed after 24 hours of reperfusion. Then, retina were isolated and processedfor the quantification of malondialdehyde (MDA) and glutathione (GSH) levels. At the end of this experiment,all groups determined significiant protection aganist formation of MDA when compared to I-R group whileMDA level of salisilaldimin (2.92 nmol/100 mg retina tissue wet weight) group was observed as it had theclosest level to the control group. According to this, lutein (3.55 nmol/100 mg retina tissue wet weight) providesmore protection than Fumaria (4.95 nmol/100 mg retina tissue wet weight), Cyperus (5.59 nmol/100 mg retinatissue wet weight), Thymus (9.16 nmol/100 mg retina tissue wet weight) Trigonella (10.46 nmol/100 mg retinatissue wet weight).When quantity of GSH was evaluated, it was observed that lutein group (2.3 nmol/100 mgretina tissue wet weight) had the closest level to the control group. According to this result, the quantity of GSHin group Fumaria was found higher than salisilaldimin (2.1nmol/100 mg), Trigonella and Cyperus (1.9 nmol/100mg retina tissue wet weight), Lutein (1.8 nmol/100 mg retina tissue wet weight) Thymus (1.8 nmol/100 mg retinatissue wet weight). As result, antioxidants which used in this experiment was found to prevent formation ofperoxidation substrat MDA and protect quantity of a antioxidant GSH.In addition, the level of caspase -3 which is a marker of apoptotic damage occured during ischemia-reperfusion was determined by using SDS-PAGE and immunoblot assay. The results of immunoblot assay werescanned to see the differences between groups by Fluor-S-Multi-Imager (Bio-Rad). According to these results,all tested antioxidants particularly lutein may use in patients with different types of ocular I/R injuries.