Harran Üniversitesi Araştırma ve Uygulama Hastanesi Mikrobiyoloji Laboratuvarında izole edilen pseudomonas aeruginosa izolatlarında antibiyotik direnç, indüklenebilir betalaktamaz ve metallo betalaktamaz oranlarının belirlenmesi

Abstract

Hastane enfeksiyonlarının önemli etkenlerinden biri olan Pseudomonas aeruginosa' nın antimikrobiyal ajanlara karşı giderek artan direnç göstermesi; tedavide zorluklara, maliyet artışına, morbidite ve mortaliteye neden olmaktadır. Bu nedenle erken ve etkin antibiyotiklerle tedaviye başlanması önem taşımaktadır.Çalışmamızda Pseudomonas aeruginosa izolatlarında antibiyotik direnç, indüklenebilir betalaktamaz (İBL) ve metallo betalaktamaz (MBL) oranları belirlenerek; P. aeruginosa infeksiyonlarında ampirik tedavi seçeneklerine, uygunsuz antibiyotik kullanımının engellenmesine ve etkin tedavi yaklaşımlarına katkı sağlanması amaçlanmıştır.Çalışmaya alınan 2009-2013 tarihleri arasındaki dört yıllık süre içerisinde Harran Üniversitesi Araştırma ve Uygulama Hastanesi Mikrobiyoloji Laboratuvarın' a gönderilen çeşitli klinik örneklerden izole edilen 100 P. aeruginosa izolatı konvansiyonel yöntemler ile tanımlanmış, antibiyotik duyarlılık testleri CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute. January2013) standartlarına göre Kirby-Bauer disk difüzyon yöntemi kullanılarak yapılmıştır. Karbapenem direncini doğrulamak için imipenem ve meropenem E test kullanılmıştır. İBL üretimini belirlemek için disk indüksiyon yöntemi kullanılmıştır. MBL üretimini belirlemek için Modifiye Hodge testi, imipenem/EDTA Kombine Disk testi, MBL E test kulanılarak sonuçları karşılaştırılmıştır.Antibiyotik duyarlılık testinde betalaktam antibiyotiklerden en az direnç seftazidimde belirlenirken kolistine direnç saptanmmamıştır. Çoklu ilaç direnci ise %8 olarak belirlenmiştir. Çoklu ilaç dirençli bu 8 izolatın 2' sinde MBL enzim üretimi belirlenmiştir. MBL enzim üretiminin çoklu ilaç direnci gösteren bakterilerde daha yüksek olduğu görülmüştür.Disk indüksiyon yöntemi ile izolatların %86' sında İBL üretimi saptanmıştır. İBL oranını yüksek olarak belirlediğimiz çalışmamızın sonucunda; seftazidim, sefepim veya piperasilin/tazobaktamın gibi antibiyotiklerin ampirik tedavide duyarlı olmasına rağmen tek başlarına kullanılması İBL üretimini indükleyeceğinden diğer antipseudomonal ilaç grubu ile kombine kullanımının, hastanemizdeki P. aeruginosa infeksiyonlarının ampirik tedavisi için doğru bir yaklaşım olacağını düşündürmüştür. Yine P. aeruginosa infeksiyonlarının tedavisi sırasında kullanılan antimikrobiyal ilaca direnç gelişebileceğinden; bu izolatların antibiyogramlarının 3-4 günlük tedaviden sonra tekrarlanması ve bu konuda klinisyenlerin bilgilendirilmesinin uygun olacağı düşünülmüştür.İBL üreten P. aeruginosa izolatlarının çoğunun ve karbapenem dirençli izolatların çoğunun yeşil renkli pigment ürettiği tesbit edilmiştir. Bu sonuçlar P. aeruginosa antibiyotik direnci ile pigment rengi arasında ilişki olabileceğini düşündürmüştür. Karbapenemlere dirençli 9 P. aeruginosa izolatının %22.2' sinde MBL üretimi tespit edilmiştir. Tüm izolatlar içinde MBL pozitif olanların oranı %2 olarak belirlenmiştir. CLSI' da MBL üretimini saptamak için önerilen standart bir test bulunmamaktadır. Çalışmamızda; IMP/EDTA Kombine Disk testi IP/IPI E test ile aynı izolatlarda ve aynı oranda MBL üretimi belirlenmiştir. Kombine Disk testinin, E test kadar güvenli, hızlı ve kolay yorumlanabilen ayrıca E teste göre maliyet yönünden çok daha uygun bir test olduğu düşünülmüştür. Rutin laboratuvarlarda karbapenemlere dirençli P. aeruginosa izolatlarında IMP/EDTA Kombine Disk testinin çalışılmasının; MBL pozitif izolatların hızla saptanmasına ve infeksiyon kontrol önlemlerinin etkin olarak uygulanmasına katkıda bulunacağı düşünülmüştür. Anahtar Kelimeler: Pseudomonas aeruginosa, antibiyotik duyarlılığı, indüklenebilir betalaktamaz, metallobetalaktamaz.

Pseudomonas aeruginosa is one of the important nosocomial infections. Increasing resistance to antimicrobial agents and rising costs have caused an increase in morbidity and mortality and in treatment difficulties. Therefore, early initiation of correct effective antibiotc is important in treatment and prevention of serious complicationsIn our study, rates of antibiotic resistance, inducible betalactamase (IBL) and metallo betalactamase (MBL) were determined in P. aeruginosa isolates in order to contribute to the prevention of inappropriate use of antibiotics, effective treatment, an increase in empiric treatment options and achievement of an efficient treatment. Throughout a period of four years, 2009-2013, 100 P. aeruginosa isolates were isolated from various clinical specimens from Research and Application Hospital patients and identified in Microbiology laboratory by conventional methods. Antibiotic susceptibility was performened using CLSI guidelines (Clinical and Laboratory Standards Institute 2013). Kirby-Bauer disk diffusion method was used. Carbapenem resistance to imipenem and meropenem was verified by the E test. Disk induction method was used to determine the IBL production while Modified Hodge test, MBL E test and combined imipenem / EDTA disk were used to determine the production of MBL. In antibiotic susceptibility, among beta lactam antibiotics the least resistance was seen against ceftazidime. All strains were uniformly sensitive to colistin. Multi-drug resistance was observed in 8% of isolates. Eghit percent of the isolates were resistant to at least three antipseudomonal drugs group (MDR), of which two isolates were postive for MBL enzyme production. The rate of MBL enzyme production was higher in multidrug-resistant isolates than others.IBL production was detected in 86% of the isolates with disk induction method. IBL rates was at a high production as a result of our study. Although P. aeruginosa are sensitive to antibiotics such as ceftazidime, cefepime, or piperacillin/tazobactam such drugs alone induce production of IBL therefore combination with other antipseudomonal drugs used was thought to be the right approach for the empirical treatment of hospital infections. Again, antimicrobial drug resistance may arise during treatment of P. aeruginosa infections. It is appropriate to repeat antibiograms 3-4 days post therapy treatment. The mostly IBL producing P. aeruginosa strains and the most Carbapenem-resistant isolates were found to have a green exopigment. These results suggest a possible relationship between antibiotic resistance and the pigment color of P. aeruginosa. MBL producing isolates were positive at the rate of 22.2% among carbapenem-resistant P. aeruginosa isolates. This rate was 2% among all studied P. aeruginosa isolates. Tthere is no standard test to determine MBL production proposed by CLSI. IMP/EDTA Combined Disk test and IP/IPI E test were found to be at the same rate in our study. IMP/EDTA Combined Disk test was fast, easily read, interpreted and even more cheaper compared to IP/IPI E test. So this test is thought to be much more affordable in terms of cost and productivity. In routine laboratorys, carbapenem-resistant P. aeruginosa determination by IMP/EDTA Combined Disk test can provide rapid detection and effective implementation of infection control measures. Keywords: Pseudomonas aeruginosa, antibiotic susceptibility, inducible beta- lactamases, metallobetalactamase.