Mide kanseri hücre hatlarında vıncrıstıne ile indüklenmiş kanser kök hücrelerinin tayini ve ilaç hassasiyetinin belirlenmesi

Abstract

Yakın zamanda, kanser kök hücreleri (KKH) kanser tedavi çalışmalarında ve tümör anjiyogenezinde odak haline gelmiştir. Ayrıca KKH'ler kanser terapileri için önemli bir hedeftir. KKH'ler kandini yenileme ve pluripotent kapasiteye sahiptir. Vincristine (VCR) çeşitli kanserlerin tedavisinde sıklıkla kullanılan kemoterapik anti kanser ilaçtır. Bununla beraber, VCR hakkında son zamanlarda yapılan çalışmalar VCR'nin kanser hücreleri ile KKH'leri arasındaki ayrımı sağladığını göstermektedir. Ayrıca tümör anjiyogenezinin KKH devamlılığı ve kemoterapik ilaç direnci arasında bağlantılı olduğu rapor edilmiştir. Notch sinyal yolağı hücre farklılaşması, devamlılığı ve anjiyogenezde kritik bir rol oynar. Ve bu yolakta Delta Benzeri Ligand 4 (DBL4) anjiyogenezde önemli bir anahtar role sahiptir. Buradan yola çıkarak AGS mide kanseri hücre hattında anti-DBL4 antikoru ile Notch yolağının susturulması ve VCR'nin etkisi ilk defa incelenecektir. AGS hücre hatlarında VCR ve anti-DBL4 antikorunun sitotoksisitesi MTT analizi ile belirlendi. VCR uygulamasının ardından, AGS hücre popülasyonundaki KKH'leri seçildi. Seçilen hücrelerde morfoloji, kolonizasyon, sferiod oluşumu ve farklılaşma analizi yapıldı. Ardından DBL4 ligandının inhibisyonu ile Notch yolağının susturulması için anti-DBL4 antikoru kullanıldı. Bu işlem sonucunda uygulama yapılmamış AGS kontrol hücreleri ile anti-DBL4 uygulanmış AGS hücrelerinin karşılaştırılması sonucunda damar benzeri yapıların gerilediği görüldü. Son olarak, VCR ve anti-DBL4 antikorunun damar benzeri yapı oluşumu üzerine kombine etkisi, AGS KKH'leri üzerinde belirlendi.

In recent years, cancer stem cells (CSCs) have come into focus in cancer treatment studies and tumor angiogenesis and it is an important target for cancer therapy. CSCs have self-renewal and pluripotent capacity. Vincristine is widely used as a chemoterapic anticancer drug to treat various cancers. Nevertheless, recent research about Vincristine indicates that it can distinguish between cancer cells and cancer stem cells. Tumor angiogenesis has also been reported to be related to CSC survival and chemoterapic drug resistance. The Notch pathway plays a critical role in cellular differentiation, survival and angiogenesis and in this pathway DLL4 ligand is as a key player in angiogenesis. Based on these, for the first time we searched for the effect of Vincristine and blockage of Notch pathway with anti DLL4 antibody in AGS gastic cancer cell line. Cytotoxicity of Vincristine and anti DLL4 on AGS cell line was determined by MTT analysis. Cancer stem cells in AGS cell population were selected following the application of Vincristine. The morfology, colonization, spheroid formation and differentiation of the selected cells were analyzed. Then, Anti DLL4 antibody was used to block Notch pathway by inhibiting DLL4 ligand to see whether vessel like structures are reversed in anti DLL4 treated AGS cells compaired to the untreated control AGS cells. Finally, the combined effect of vincristine and anti DLL4 on vessel like structure formation was determined on cancer stem cell like AGS cells.