Meyerozyma guilliermondii` de pulse field jel elektroforezi-genomik DNA`nın restriksiyon enzim analizi için uygun enzimin belirlenmesi

Abstract

Amaç: Meyerozyma guilliermondii, fırsatçı insan patojeni olarak kan dolaşımı enfeksiyonu (kandidemi) gibi ciddi enfeksiyonların etkeni bir maya türüdür. Bu çalışmada, M. guilliermondii suşlarının moleküler epidemiyolojik analizlerinde kullanılabilecek Pulse Field Jel Elektroforezi-Genomik DNA'nın Restriksiyon Enzim Analizi (PFGE-REAG) yöntemi için uygun restriksiyon enziminin belirlenmesi amaçlandı. Gereç ve Yöntem: Bu çalışmaya, Karadeniz Teknik Üniversitesi Farabi Tıp Fakültesi Hastanesi Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarında izole edilen, 9 hastanın epidemiyolojik olarak ilişkili 12 M. guilliermondii suşu dahil edildi. PFGE-REAG yöntemi, CHEF DR III (BioRad, ABD) cihaz sistemi kullanılarak SfiI, NotI ve PacI restriksiyon endonükleaz enzimleri ile çalışıldı.Bulgular: SfiI ile kesim reaksiyonu sonucunda, moleküler büyüklük marker'ı aralığına dağılmış ve daha net ayırt edilebilen bantlar izlendi. SfiI ve NotI bant profilleri, karyotipleme bant profilleriyle karşılaştırıldığında; REAG protokolünün karyotiplemeden daha ayırt edici olduğu sonucuna varıldı.Sonuç: REAG-SfiI, epidemiyolojik olarak ilişkili M. guilliermondii suşlarının klonal ilişkisini belirlemede kullanılabilir. Bu çalışmayla, epidemiyolojik olarak ilişkili M. guilliermondii klinik izolatlarının klonal ilişkisinin değerlendirilmesine yardımcı olacak REAG metodunun belirlenmesine katkı sağlandı. Anahtar Kelimeler: Meyerozyma guilliermondii, Pulse Field Jel Elektroforezi, Restriksiyon Enzimi

Objective: Meyerozyma guilliermondii is a species of yeast that causes serious infections such as bloodstream infection (candidaemia) as an opportunistic human pathogen. In this study, it was aimed to determine the appropriate restriction enzyme for Pulse Field Gel Electrophoresis- Restriction Enzyme Analysis of Genomic DNA (PFGE-REAG) method which can be used in molecular epidemiological analysis of M. guilliermondii strains.Materials and Methods: In this study, epidemiologically related 12 M. guilliermondii strains of 9 patients isolated in the Medical Microbiology Laboratory of the Medical School Hospital of the Karadeniz Technical University were included. PFGE-REAG method was studied by using CHEF DR III (BioRad, USA) device system with SfiI, NotI and PacI restriction endonuclease enzymes.Results: As a result of restriction reaction with SfiI, bands that were scattered across the range of molecular size markers and were more clearly distinguishable were observed. SfiI and NotI band profiles were compared with the karyotyping band profiles; It was concluded that the REAG protocol was more distinctive than the karyotyping.Conclusion: REAG-SfiI can be used to determine the clonal relationship of epidemiologically related M. guilliermondii strains. This study contributed to the determination of the REAG method which will help to evaluate the clonal relatedness of epidemiologically related M. guilliermondii clinical isolates. Key Words: Meyerozyma guilliermondii, Pulse Field Gel Electrophoresis, Restriction Enzyme