Anabolik steroidlerin idrardan izolasyonları ve tanımlanmaları, testosteron ve epitestosteronun GSK ile tayini

Abstract

62 ÖZET Uluslararası Olimpiyat Komitesince yasaklanmış ilaçlar listesin deki anabolik steroid yapısındaki 7 ilaç ve türevleri için (testosteron, oksimetolon, metenolon enontat, nandrolon, fenilpropiyonat, nandrolon p-heksiloksifenilpropiyonat, 4-hidroksi-19-nortestosteron 17-siklopenfil- propiyonat) duyarlı ve güvenilir bir tarama yöntemi geliştirilmiştir. Bu steroidlerin İTK'da çeşitli renk belirteçleri ve hareketli fazlar ile silikajel G sabit fazı üzerinde 5-10 yg duyarlıkta tanımlanma ları mümkün olmuştur. Bu maddelerin biyolojik materyal olarak seçilen idrardan izolas yonları eter ile ekstraksiyon ve XAD-2 kolon kromatografisi ile yapılmış tır. Elde edilen ekstrakt ve elüat ince tabaka kromatograf isine uygulan mıştır. Testosteron/epi testosteron oranının saptanması için gaz sıvı kromatografisi ile kantitatif tayin yapılmıştır. %3 SE-30 sabit fazında FID detektörü kullanarak 260 C 'deki fırın sıcaklığında çalışılmıştır. Testosteron ve epitestosteron birbirlerinden ayrılması için asetil türev leri oluşturulmuştur. Türevleme ile 0.05 yg/5 yi duyarlılığa inilmiştir. Doğrudan bu iki madde ile çalışıldığında ise duyarlık 0.2 yg/5 yi olarak bulunmuştur. Testosteron ve epitestosteronun idrarda glukuronid kon jügatl arı nın hidrolizi asit ve enzimatik yöntemlerle karşılaştırılmıştır. Asit hidroliz ve benzen ekstraksiyon yöntemi, verimin daha yüksek ve ekonomik olması nedeni ile tercih edilmiştir. Bu yöntemle verim testosteron için %73±3.9, epistestosteron için %75.94± 7.9 olarak bulunmuştur. Araştırmanın son bölümünde normal kadın ve erkek idrarlarında testosteron/epitestosteron oranı saptanmıştır. Deneme şahıslarında bu oran 2.39±0.66 olarak bulunmuştur. Testosteron türevi ilaç verilen bir hastanın idrarında bu oran 5 olarak bulunmuştur.

63 SUMMARY Isolation and Determination of Anabolic Steroids in Urine; Identification of Testosterone and Epi testosterone by GLC A sensitive and reliable screening test has been developed for seven anabolic steroid drugs and their derivatives (testosterone, oxymetholone, methenolone enanthate, nandrolone, nandrolene phenyl propionate, nandrolene p-hexyloxy phenyl propionate, 4-hydroxy-19- nortestosterone - 17 - cyclopentyl propionate} subject to the list of prohibited drugs issued by the International Olympic Committee. It was possible to identify these steroids at the sensitivity degree of 5-10 jug on TLC by various colour reagents and mobile phases on silicagel G as the stationary phase. Isolation of these substances from urine as a biological material has been made by extraction with ether and XAD-2 column chromatography. Obtained extract and eluate has been applied to thin layer chromatography. The quantitative determination has been made to determine by GLC of testosterone/epi testosterone ratio. It has been carried out at oven temperature of 260°C by using FID detector at 3% ŞE-30 column system. Acetyl derivatives were formed to seperate these testosterone and epi testosterone from each other. The sensitivity degree of 0.05 jug/5 i*l was reached by using derivatization. But the degree was found to be 0.2 Mg/5 Ml when these two materials directly used.64 Hydrolysis of the glucuronide conjugates of testosterone and epi testosterone in urine was compared to each other by acid and enzymatic methods. Acid hydrolysis and benzen was choosen, because the results would be more higher and economical when they used. The recovery was found 73.79 ± 3.9% for testosterone and 75.94 ± 7.9% for epi testosterone by using this method. The testosterone/epi testosterone ratio was determined in urine of normal women and men. The ratio was found 2.39 ± 0.66 for subjects. The ratio was found 5 for a patient who was given testosterone derivatives,