Mikrotitrasyon plak enzymeimmunoassay yöntemiyle ineklerde doğum sonrası süt progesteron düzeylerinin tayini

Abstract

7. ÖZET Bu çalışmada, süt ineklerinde doğum sonrası dönemde yağsız süt progesteron seviyeleri mikrotitrasyon plak enzymeimmunoassay yöntemi ile tayin edildi. lla-OH-Progesterone-Hemisuccinate, Horse Radish Peroxidase ile işaretlendi. lla-OH-Progesterone,Hemisuccinate-BSA'ya karşı tavşanlarda üretilen antiserumdan IgG fraksiyonu sodyum sülfat (% 18) presipitasyonu ile saf laştır ildi. Antiserumun progesteron, testosteron ve aldosteron ile olan çapraz reaksiyonları sırasıyla % 100, % 0.21, % 0.18 olarak ve diğer steroidlerle (hydrocortisone, cortisone, estrone, estradiol, estrone sul fate, estriol) olan çapraz reaksiyonlar ise % 0.1 ' den az bulundu. Kalite kontrolü çalışmalarında deney içi varyasyon katsayıları düşük, orta ve yüksek düzey kontrol örnekleri için sırasıyla % 13.9, % 8.1, % 6.9, deneyler arası varyasyon katsayıları ise yine üç kontrol için sıra sıyla % 9.6, % 9.3 ve % 10.6 olarak bulundu. RIA ve El A arasındaki kore lasyonun (r= 0.91) önemli (p<0.01), EIA testindeki ortalama verim (recovery) oranın % 91.7 ve tayin edilebilen en düşük miktarın 4 pg/delik olduğu saptandı. Doğumdan ovaryum aktivitesinin başlamasına (ilk progesteron yük selmesine) kadar geçen sürenin 33.44 ± 11.5 gün olduğu ve bu süre içinde progesteronun yağsız sütte 0.5 ng/ml'den aşağıda bulunduğu görüldü. Post partum dönemdeki ilk siklus süresi (13.8 ± 1.07. gün) bunu takip eden nor mal siklus süresinden (21.38 ± 1.07 gün) önemli Ölçüde (p<0.00l) kısa bu lundu ve bu iki siklusun luteal evrelerindeki progesteron miktarları ara sındaki fark önemli (p<0.001) oldu. Ayrıca kısa siklus öncesi post partum sürenin normal siklus öncesi süreden daha kısa olduğu tespit edildi. Post partum dönemin ilk ovulasyonundaki gizli kızgınlık oranı % 76.1 olarak be lirlendi. Gebe kalan hayvanlarda ortalama post partum süre 125.5 ± 43.9 gün olarak bulundu. Gebe olanlar (>1 ng/ml) ve olmayanlar (<0.5 ng/ml) ara sında 19. - 23. günler aralığındaki progesteron değerleri farkının önemli (p<0.001) olduğu hesaplandı.46 Sonuç olarak, EIA tekniği kolay, güvenilir ve ekonomik bir tek nik olarak bulunmuştur. Böylece, hayvancılıkta bir çok infertilite problenmlerinin teşhisinde ve bu problemlerin asgariye indirilmesinde kullanılabilir.

8. SUMMARY DETERMINATION OF MILK PROGESTERON LEVELS DURING POST PARTUM IN COWS BY USING MICROTITRATION PLATE ENZYMEIMMUNOASSAY In this study, skim milk progesterone levels in dairy cows, du*- ring post partum period, were determined by using microti tration plate enzymeimmunoassay. lla-OH-Progesterone-Hemisuccinate was labelled with Horse Radish Peroxidase. Antiserum was produced in rabbits against llct-OH-Progeste- rone-Hemisuccinate-BSA and IgG fraction of this antiserum was prufied by sodium sulphate (% 18) precipitation. Cross reactions of antiserum were 100 %, 0.21 %, 0.18 % for progesterone, testosterone and aldoste rone, respectively, and were less than 0.1 % for other steroids, such as, hydrocortisone, cortisone, estrone, estradiol, estrone sulfate and estriol. In quality control studies, intra-assay coefficients of varia tion were 13.9 %, 8.1 % and 6.9 % for low, medium and high levels of control samples, respectively. The inter-assay coefficients of varia tion of 9.6 SS, 9.3 % and 10.6 % were obtained for low, medium and high. levels of control samples, respectively. The correlation between RIA and EIA was r= 0.91 and statistically significant (p<0.01). The average recovery of the assay was found to be 91.7 % and the detection limit was 4 pg/well. The post partum interval from parturition to the resumption of ovarian activity (first elevation of progesterone) was 33.44 ± 11.5 day and skim milk progesterone levels were less than 0.5 ng/ml during this period. The duration of first post partum cycle was significantly (p<0.001) shorter (13.8 ± 1.07 day) than subsequent normal cycle (21.38 ± 1.07 day) and the luteal phase progesterone levels between these two cycles were also significantly different (p<0.001). On the other hand, the post partum periods up to first short cycles were generally shorter than those of normal cycles. The rate of silent heat48 during the first ovulation of post partum was 76.1 %. The mean duration of post partum period was 125.5 ±43.9 day in pregnant animals. The progesterone values between the pregnant (>1 ng/ml) and non-pregnant (<0.5 ng/ml) animals on days 19 - 23 were highly significant. (p<0. 001) In conclusion, the enzymeimmunoassay technique was found to be easy, reliable and economic. So, it is advisable to use it for diagnosis and reduction of many infertility problems in animal husbandary.