Sığır dalak asit fosfatazının kısmen saflaştırılması, fizikokimyasal ve kinetik özelliklerinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, sığır dalağından asit fosfataz enzimi kısmen saflaştırılarak, fi zikokimyasal ve kinetik özellikleri incelenmiştir. Salfaştırılan enzimin önce p-nitrofenil fosfat substratı için Michaelis-Menten ve Lineweaver-Burk grafikleri çizilerek Km değeri 0,14 mM olarak hesap lanmıştır. Daha sonra amonyum molibdat, arsenik asit, sodyum pirofosfat, prolin, lityum sülfat, sıcaklık ve pH'nın enzim aktivitesi üzerindeki etkileri araştırılmıştır. Amonyum molibdat ve arsenik asit'in enzim üzerinde kompetitif inhibisyon meydana getirdiği, sodyumpirofosfatın, allosterik inhibisyona yol açtığı, prolinin enzim aktivitesi üzerinde hiçbir etkisinin olmadığı, lityum sülfatın enzim aktivite sini artırdığı, sıcaklığın etkisinin 37°C ile 60°C arasında ani bir aktivite artışı şeklinde ortaya çıktığı ve bu enzim için optimal pH nın 4-5 arasında bulunduğu tespit edilmiştir.

In this study, enzyme acid phosphatase had partially purified from bovine spleen and its physicochemical and kinetic properties were detected. Initially, we calculate the Km value of the enzyme as 0,14 mM for substrate p-nitrophenylphosphate, after drawing the graphics of Michaelis-Menten and Lineweaver-Burk. Then, effects of ammonium molybdate, arsenic acid, sodium pyrophosphate, prolin, lityum sulphate, temperature and pH on the enzyme activity were detected. At the end of our study, we have found the results that: 1 -Ammonium molybdate and arsenic acid are competitive inhibitors of the enzyme 2-sodium-pyrophosphate has an allosteric effect on the behaviour of the enzyme. 3-prolin has no significant effect on the enzyme 4-Lityum sulphate activates the enzyme 5-When we increase the experimental incubation temperature, between 37°C and 60°C, enzyme activity shows a sharp rise. 6-The optimal pH range for this enzyme is 4-5.