Diyabetik sıçan lenslerinde kalmodulin glikasyonu

Abstract

80 ÖZET Çalışmamızda, diabetik rat lens dokularından izole edilen CaM aktivitesinde meydana gelen değişiklikler saptanmıştır. 200-250 g ağırlığındaki erkek ratlar 45 mg/kg streptozotosin enjeksiyonu ile ile diyabetik yapılmışlardır. 1., 4., 6., 8., 10. ve 15. haftaların sonunda hayvanların kan glukoz düzeyleri ve ağırlıkları tespit edildikten sonra öldUrlilUp, lens dokuları alınmış ve CaM aktiviteleri saptanmak Üzere `Kaynatılmış ekstreler` elde edilmiştir. Kaynatılmış ekstreler Glikojel B kolonlarına tatbik edildikten sonra glikozillenmis ve glikoziilenmemiş CaM eluatları toplanmış ve liyofilize edilmiştir. Liyofilize eluatlar ve kaynatılmış ekstrelerdeki CaM aktiviteleri sığır beyninden elde ettiğimiz PDE'nin aktivasyonu ile saptanmıştır. Ayrıca, TBA yöntemi ile glikozillenmis protein miktarları tayin edilmiştir. Lens kaynatılmış ekstresi ve kolon sonrası lens liyofilizatlarında bulunan CaM kullanıldığında PDE aktiviteleri kontrol grubuna göre tUm haftalarda anlamlı olarak azalmıştır. Kaynatılmış ekstreler ile kontrol grubunda % 100 e ulasan PDE aktivitesi, 1. hafta da % 61.25, 4. hafta da % 51.39, 6. hafta da % 66.16,81 8. hafta da % 65.46, 10. hafta da % 63.23, 15. hafta da % 47.34 olarak saptanmıştır. Kolon sonrası lens liyofilizatı kullanıldığında ise, PDE aktiviteleri 1. hafta da % 53.13, 4. hafta da % 41, 6.hafta da % 53.10, 8.hafta da % 46, 10.hafta da % 52, 15.hafta da % 43 olarak saptanmıştır. TBA yöntemi ile glikozillenmis protein miktar tayini sonuçları ise % aktivite sonuçlarını desteklemektedir. Kaynatılmış ekstre ve glikozillenmis liyofilizatların glikozillenme düzeyleri kontrole göre anlamlı artış göstermiştir. Protein miktar tayinleri Lowry metoduna göre yapılmıştır.

82 SUMMARY CALMODULIN GLYCATION İN DIABETIC RAT LENSES in our study, we determined the activity differences of CaM which is isolated from diabetic rat lens tissues. 200-250 g weighing male rats were rendered diabetic by injection of 45 mg/kg streptozotosin. ist, 4th, 6th, 8th, lOth, 15th weeks blood glucose levels and weights of the animals were measured and than animals were killed, lens tissues were collected and `Boiled extracts` were isolated for determining the CaM activities. `Boiled extracts` were applied to Glycogel B columns, glycozylated and nonglycozylated calmodulin eluats were collected and liofilizated. Liofilizated eluats' and boiled extracts' calmodulin activities were determined with the PDE activation which is isolated from bovine brain. Besides, glycozylated protein amounts were determined by TBA method. PDE activities were significantly reduced compared to control groups in ali weeks when lens boiled extract and CaM in eluted lens liofilizate were used. The PDE activities were reduced to % 61.25 at ist week, 51.39 % at 4th week, 66.16 % at 6th week, 64.46 % at 8th week, 63.23 % at lOth week and 47.34 % at 15th week with boiled extracts whereas83 PDE activities were reduced to 53.13 % at ist week, 41.00 % at 4th week, 53.10 % at 6th week, 46.10 % at 8th week, 52.00 % at lOth week, 43.00 % at 15th week with eluted lens liofilizate. The results of glycozylated protein determination with TBA methods were in accordence with CaM activities. Glycozylation levels of boiled lens extracts and eluted liofilizates were elevated significantly according to the control group. Protein amounts were determined with Lowry raethod.