Diyabetik sıçan beyinlerinde kalmodulin glikasyonu ve elektroforetik özellikleri

Abstract

58 ÖZET : Diyabetik Sıçan Beyinlerinde Kalmodulin Glikozilasyonu ve Elektroforetik özellikleri: Çalışmamızda, diyabetik sıçan beyin dokularından izole edilen kalmodulin (CaM) aktivitesinde meydana gelen değişiklikler saptanmıştır. 200-250 g ağırlığındaki erkek ratlar 45mg/kg streptozotosin enjeksiyonu ile diyabetik yapılmışlardır. 1. ve 8. haftaların sonunda sıçanların kan glukoz düzeyleri ve ağırlıkları tespit edildikten sonra öldürülüp, beyin dokuları alınmış ve CaM aktiviteleri saptanmak Üzere `Kaynatılmış ekstreler` elde edilmiştir. Ayrıca, TiyobarbitUrik Asit (TBA) yöntemi ile glikozillenmis protein miktarları tayin edilmiştir. Yapılan poliakrilaraid jel elektroforezi (PAGE) ile farklı göç eden CaM bantları araştırılmıştır. Beyin kaynatılmış ekstresinde bulunan CaM kullanılarak yapılan deneylerde f osf odiesteraz (PDE) aktiviteleri kontrol grubuna göre tUm haftalarda anlamlı olarak azalmıştır. Kaynatılmış ekstreler ile kontrol grubunda 11.3xl0-3 U(% 100± 0.00) e ulasan PDE aktivitesi, 1. hafta da 7.7xl0~3 U (% 69.15±0.44),8. haftada 6.9xl0~3 U (% 61.97±2.0) olarak saptanmıştır. TBA yöntemi ile glikozillenmis protein miktar tayini sonuçları ise % aktivite sonuçlarını desteklemektedir. Kaynatılmış ekstrelerde glikozillenme düzeyleri kontrole göre anlamlı artış göstermiştir. Yapılan PAGE 'inde ise örnekteki Ca2`*` a bağlı olarak göç hızı artmış, ancak glikozillenmenin sonucu olarak 1. ve 8. haftalarda saf CaM' e göre daha yavaş göç eden CaM bantlarına rastlanmıştır. Anahtar kel ime ler: Kal modül in, diyabet, elektroforez.glikozilasyon

59 SUMMARY : Electrophoretical Examination of Calmodulin Glycosylation in Diabetic Eat Brains: In our study, after isolating calmodulin (CaM) from diabetic rat brain tissues, we determined the activity and mobility differences. 200-250 g weighing male rats were rendered diabetic by injection of 45 mg/kg streptozotosin. Is* and 8*H week rats' blood glucose levels and weights were measured, brain tissues were collected and `Boiled extracts` were isolated. We used Thiobarbituric Acid (TBA) method to understand the glycosylated protein amounts. We also searched for the mobility of the CaM bands with Polyacrylamid Gel Elektrophoresis (PAGE). We observed that the phosphodiesterase (PDE) activation ability of boiled brain extracts at the 1** and 8**1 week diabetics were significantly reduced when they were compared with the control groups. The PDE activities were reduced to 7.7xl0-3 U (69.15±0.44 %) at the 1st week, 6.9xl0-3 Ü (61.97± 2.0%) at the 8tH week diabetic rats. The results of glycosylated proteins by TBA method were in accordence with CaM activities. Glycosylation levels of boiled brain extracts were elevated significantly according to the control group. During PAGE, upon incubation in the presence of calcium, brain CaMs migrated faster. On the other hand, we observed that glycosylation causes slow migration for the Is* and 8th week diabetic rat boiled extracts than pure CaM. Key words :Calmodulin, diabetes, electrophoresis, glycosylation