Akut böbrek hasarında aday miRNA ekspresyon profilinin,hücre hattı modellemesi kullanılarak araştırılması

Abstract

Amaç: Kontrasta bağlı akut böbrek hasarı [Kİ-ABH] klinik komplikasyon olup artmış mortalite, uzamış hastanede yatış ve artan tıbbi maliyetlerin önemli bir nedenidir. Kİ-ABH'da etkili müdahaleler almak için erken teşhis ve koruyucu önlemler kilit öneme sahiptir. Tanı yaygın olarak kullanılan fakat renal hasarın gerçek zamanının gerisinde kalan ve erken tanı ve müdahaleleri ciddi şekilde etkileyen serum kreatinin seviyelerine bağlıdır. MikroRNA'nın [miRNA] erken Kİ-ABH tanısında yararlı bir biyobelirteç olduğu bulunmuştur. Çalışmamızda Kİ-ABH'da miRNA ekspresyon profilinin oluşturulması ve biyobelirteç olabilecek yeni miRNA'ların saptanması amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda insan böbrek tübüler epitelyal HEK-293T hücreleri, Kİ-ABH hücre modeli oluşturmak için ioheksol ile muamele edildi. Hücre canlılık testi uygulaması sonrasında, kültüre edilen hücrelerden RNA izolasyonu yapıldı. miRNA microarray ile ekspresyon profillendirmesi gerçekleştirildi. Bulgular: HEK-293T hücrelerine kontrast madde olarak ioheksol verilip hücre canlılık testi uygulandığında, hücre morfolojisinde değişiklik olmadığı gözlemlendi. Hücrelerden RNA izolasyonu sonrasında, miRNA PCR array ile ekspresyon profillendirmesi değerlendirildiğinde, 20 miRNA'nın downregüle ve 6 miRNA'nın upregüle olduğu saptandı. Analiz sonucunda anlamlı değişim saptanmış 3 miRNA (miR-378a-3p, miR-182-5p, miR-23b-3p) real-time PCR yöntemi ile valide edilmiştir. Üçlü tekrar edilen örneklerden two-way ANOVA ve paired t-test yöntemleri kullanılarak istatistiksel analizler gerçekleştirilmiş olup, sonuçlar istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur (**p< 0.01). Sonuçlar: Literatüre bakıldığında kontrast nefropati çalışmalarında saptanmayan bu miRNA'lardan miR-182-5p, miR-221-3p, miR-151a-5p, miR-181b-5p, miR-23b-3p, miR-103a-3p, miR-23a-3p, miR-378a-3p, miR-191-5p, miR-17-5p nefrotoksinler, sepsis, I/R hasarı gibi farklı etyolojilere bağlı ABH modellerinde saptandığı görüldü. Anahtar Kelimeler: Akut böbrek hasarı, kontrast nefropati, miRNA

Aim: Contrast-induced acute kidney injury [CI-AKI] is a clinical complication and is an important cause of increased mortality, prolonged hospitalization and increased medical costs. Early diagnosis and preventive measures are key for effective interventions in CI-AKI. Diagnosis is based on serum creatinine levels, which are widely used but lag behind the actual time of renal injury and seriously affect early diagnosis and intervention. MicroRNA [miRNA] has been found to be a useful biomarker in the early diagnosis of CI-AKH. In our study, it was aimed to establish the miRNA expression profile in CI-AKH and to detect new miRNAs that could be biomarkers.Material and Methods: In our study, human renal tubular epithelial HEK-293T cells were treated with iohexol to generate a KI-ABH cell model. After the cell viability test, RNA was isolated from the cultured cells. Expression profiling was performed with miRNA PCR array.Results: When iohexol was given to HEK-293T cells as a contrast agent and cell viability test was applied, no change in cell morphology was observed. When expression profiling by miRNA microarray was evaluated after RNA isolation from cells, 20 miRNAs were downregulated and 6 miRNAs were upregulated. Three miRNAs (miR-378a-3p, miR-182-5p, miR-23b-3p) with significant changes as a result of the analysis were validated by real-time PCR method. Statistical analyzes were performed using two-way ANOVA and paired t-test methods from the triple replicated samples, and the results were found to be statistically significant (**p< 0.01).Conclusion: It was observed that among these miRNAs which were not found to be associated with contrast nephropathy in recent studies, miR-182-5p, miR-221-3p, miR-151a-5p, miR-181b-5p, miR-23b-3p, miR-103a-3p, miR- 23a-3p, miR-378a-3p, miR-191-5p, miR-17-5p were detected in AKI models due to different etiologies such as nephrotoxins, sepsis, I/R injury.Keywords: Acute kidney injury, contrast nephropathy, miRNA