Russula delıca, Schızophyllum commune, Agrocybe cylındracea mantar ekstrelerinin normal ve kanser hücrelerine sitotoksik, genotoksik ve apoptotik etkilerinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada Russula delica, Schizophyllum commune, Agrocybe cylindracea mantarlarının genotoksisite, sitotoksisite, apoptotik, nekrotik ve hücre proliferasyon etkileri incelendi. Laboratuvarda kuru olarak korunan basidiokarplardan alınan parçalar, katı ve sıvı kültürde geliştirildi. Numuneler Soxhlet cihazında 80°C, %70'lik etil alkolde 1 saat ekstraksiyon edilerek sitotoksisite, apoptotik ve nekrotik çalışmalar için hazırlandı. Sitotoksisite çalışmalarında ekstrakt MCF-7 kanser hücrelerine ve L929 Fibroblast hücrelere örnek konsantrasyonları 5mg/mL, 2.5mg/mL, 1.25mg/mL, 0.625mg/mL, 0.3125mg/mL olarak uygulandı. WST-1 solüsyonu eklenerek inkübasyon sonucunda 440 nm dalga boyunda mikroplate okuyucuda absorbans ölçümü yapıldı. İkili boyama deneyi ile aynı hücre hattında apoptoz ve nekroz belirlendi. İkili boyama solüsyonu hazırlanarak MCF-7 kanser hücrelerine ve L929 Fibroblast hücrelere aynı konsantrasyonlarda uygulandı. İnkübasyon sonucunda floresan ataçmanlı mikroskop FITC ve DAPI filtresinde 20X büyütmede ölçüm yapıldı. Russula delica'nın 5 mg/mL konsantrasyondaki ekstresinin her iki hücre hattında da sitotoksik etkisi gözlendi. Schizophyllum commune, Agrocybe cylindracea ekstrelerinde ise toksik etki gözlenmedi. Çalışmada düşük indekslerde apoptoz ve nekroz belirlendi. Genotoksisitenin belirlenmesi için mantar ekstreleri 25μg/mL ve 12.5μg/mL konsantrasyonlarda CHO hücrelerine uygulandı. Russula delica, Schizophyllum commune, Agrocybe cylindracea ekstrelerinin uygulanan konsantrasyonlarda herhangi bir genotoksik etki göstermediği belirlendi.

In the study, cytotoxicity, genotoxicity, apoptotic, necrotic and cell proliferation effects of Russula delica, Schizophyllum commune, Agrocybe cylindracea were investigated. Taken parts from dry preserved basidiocarps in the laboratory were developed in solid and liquid culture. The samples were prepared for cytotoxic, apoptotic, necrotic, studies by extracting at 80°C and 1 h in ethylalcohol at Soxhlet device.In cytotoxicity studies, sample concentrations for extract MCF-7 cancer cells and L929 Fibroblast cells were applied as 5mg/mL, 2.5mg/mL, 1.25mg/mL, 0.625mg/mL, 0.3125mg/mL respectively. The WST-1 solution was added and the absorbance was measured in a microplate reader at a wavelength of 440 nm at the end of the incubation. Apoptosis and necrosis were detected in the same cell line as the double staining experiment. Binary staining solution was prepared and MCF-7 cancer cells and L929 Fibroblast cells were applied at the same concentrations. As a result of incubation, the measurement was done at fluorescense microscopy at 20X magnification in FITC and DAPI filters. Cytotoxic effect of the extract of Russula delica at concentration of 5mg/mL was observed on both cell lines. Toxic effects of Schizophyllum commune, Agrocybe cylindracea extracts were not observed. Apoptosis and necrosis were determined at low indices in the study. In genotoxicity studies, sample concentrations for extracts CHO cells were applied as 25μg/mL and 12.5μg/mL respectively. It was determined that Russula delica, Schizophyllum commune, Agrocybe cylindracea extracts did not show genotoxic effect at applied concentrations.