Agarıcus sylvatıcus, Laetıporus sulphureus mantar ekstrelerinin normal ve kanser hücrelerine sitotoksik, genotoksik ve apoptotik etkilerinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, Agaricus sylvaticus ve Laetiporus sulphureus'un sitotoksisite, genotoksisite, apoptotik, nekrotik ve hücre proliferasyon etkileri incelenmiştir. Laboratuvarda kuru olarak korunan basidiokarplardan alınan parçalar, katı ve sıvı kültürde geliştirildi. Numuneler Soxhlet cihazında 80°C, %70'lik etil alkolde 1 saat ekstraksiyon edilerek sitotoksisite, apoptik ve nekrotik çalışmalar için hazırlandı. Sitotoksisite çalışmalarında, ekstrakt MCF-7 kanser hücrelere ve L929 Fibroblast hücrelere örnek konsantrasyonları 0.5mg/mL, 0.25mg/mL, 0.125mg/mL, 0.0625mg/mL, 0.03125mg/mL olarak uygulandı. WST-1 solüsyonu eklenerek inkübasyon sonucunda 440 nm dalga boyunda mikroplate okuyucuda absorbans ölçümü yapıldı. İkili boyama deneyi ile aynı hücre hattında apoptoz ve nekroz belirlendi. İkili boyama solüsyonu hazırlanarak MCF-7 kanser hücrelere ve L929 Fibroblast hücrelere aynı konsantrasyonlarda uygulandı. İnkübasyon sonucunda florasan ataçmanlı mikroskop FITC ve DAPI filtresinde 20X büyütmede ölçüm yapıldı. MCF-7 kanser hücre hatlarında düşük oranlarda sitotoksisite gözlendi. L929 Fibroblast hücre hatlarında canlılık oranları artmıştır. Düşük indekslerde apoptoz ve nekroz belirlendi.Genotoksisite çalışmalarında, mantar ekstreleri CHO hücrelerine örnek konsantrasyonları 25µg/mL ve 12.5µg/mL olarak uygulandı. Örneklerde genotoksisite gözlenmedi.

In this study, cytotoxicity, genotoxicity, apoptotic, necrotic and cell proliferation effects of Agaricus sylvaticus and Laetiporus sulphureus were investigated. Taken parts from dry-preserved basidiocarps in the laboratory were developed in solid and liquid culture. The samples were prepared for cytotoxic, apoptotic, necrotic, studies by extracting at 80°C and 1 h in ethyl alcohol at Soxhlet device. In cytotoxicity studies, sample concentrations for extract MCF-7 cancer cells and L929 Fibroblast cells were applied as 0.5mg/mL, 0.25mg/mL, 0.125mg/mL, 0.0625mg/mL, 0.03125mg/mL respectively. The WST-1 solution was added and the absorbance was measured in a microplate reader at a wavelength of 440 nm at the end of the incubation. Apoptosis and necrosis were detected in the same cell line as the double staining experiment. Binary staining solution was prepared and MCF-7 cancer cells and L929 Fibroblast cells were applied at the same concentrations. As a result of incubation, the measurement was done at fluorescense microscopy at 20X magnification in FITC and DAPI filters. Cytotoxicity was observed at low rates in MCF-7 cancer cells lines. Viability rates were increased in L929 Fibroblast cell lines. Apoptosis and necrosis were determined at low indices. In genotoxicity studies, sample concentrations for extracts CHO cells were applied as 25μg/mL and 12.5μg/mL respectively. Genotoxicity was not observed in the samples.