Toksoplazmosis tanısında kullanılan test kitlelerinin (ELISA, IFA) hazırlanması, non-nested PCR kullanımının geliştirilmesi

Abstract

67 VI. ÖZET Toksoplazmozis, Toxoplasma gondii' tün neden olduğu, dünyanın hemen her yerinde gerek insanlarda gerekse evcil ve yabani hayvanlarda görülen bir zoonozdur. Tanı; doku kültürü veya hayvan inokülasyon çalışmaları, histolojik araştırmalar, serolojik ve moleküler yöntemlerden oluşmaktadır. Histolojik inceleme bulguları, doku kültürü veya hayvan inokülasyon çalışmalarının tam koydurucu olmasına karşın akut-kronik olguların ayırdedilmesinde yetersiz kalması, serolojik ve moleküler tanıyı ön plana çıkarmıştır. Çalışma iki ayrı aşamadan oluşmaktadır; toksoplazmozis şüpheli 96 hastadan alınan serum örneklerinde aynı suşdan (T.gondii-Ankaxa, susu) hazırlanan klasik tanı yöntemlerinden ELISA ve İFA in-house kitlerinin optimizasyonlan ile klinik olarak toksoplazmozis tanısı konmuş toplam 43 hastadan alınan dört parafinle kaplı lenf doku biyopsi, beş beyin omurilik sıvısı, 1 1 lenf bezi biyopsisi, 1 1 amnion sıvısı, dört kordon kam, bir humör aköz ve yedi kemik iliği örneklerinde moleküler tam yöntemlerinden PCR sistemi ile T. gondii DNA' sının aranması. In-house olarak hazılanan ELISA ve İFA testleri ile 96 hastada IgG ve IgM antikorlarına bakılmıştır. Referans test olarak Sabin Feldman dye testi kullanılmıştır. Örneklerin ELISA ile %55.2'sinde ve İFA ile %46.8'inde IgG antikorları pozitif bulunmuştur. IgM antikorları için örneklerin ELISA ile %58.3'ünde ve İFA testinde %46.8'inde seropozitiflik bulunmuştur. PCR tekniği ile beş beyin omurilik sıvısının ikisinde, 1 1 lenf bezi biyopsisinin dördünde, 1 1 amnion sıvısının beşinde, dört kordon kanının birinde ve yedi kemik iliğinin ikisinde pozitif sonuç elde edilirken, bir hümor aköz ve dört parafinle kaplı lenf doku biyopsi örneklerinde Toxo DNA' sına rastlanmamıştır. Sonuç olarak, aynı suşlardan elde ettiğimiz antijenlerle in-house olarak yaptığımız ELISA ve İFA test kitleri, ticari kitler kadar başarılı bir şekilde çalıştıkları gözlemlenmiştir. Böylece hastalığın tanısında daha doğru, güvenilir ve ekonomik sonuçlar vermek mümkün olmaktadır. Özellikle immün yetmezlikli hastalarda toksoplazmozis tanısının konmasında; serolojik testlerin yetersizliklerinden kaynaklanan boşluğu daha ileri bir yöntem olan PCR hastane rutinine kazandırılmıştır.

68 VH. SUMMARY PREPARATION OF THE TEST KITS (ELISA, IFA) WHICH ARE USED IN THE DIAGNOSIS OF TOXOPLASMOSIS, IMPROVMENT OF NON-NESTED PCR USE Toxoplasmosis is a zoones caused by Toxoplasma gondii and can be found on humans and domestic and wild animals almost everywhere around the world. Diagnosis, tissue sample or animal inoculation studies consist of histologic research and serologic and molesular methods. Though histologic examination findings, tissue sample and animal inoculation studies enable to diagnose, they are insufficient to differentiate acute- chronic facts. This has caused serologic and molecular diagnosis to gain prominence. The study consists of two stages. Optimisation of ELISA and IFA in-house kits of classic diagnosis method from the same species (T.gondii-Arikaxa, species) at the sera samples taken taken from 96 patients with possible toxoplasmosis and the search of PCR system of molecular method of diagnosis and T.gondii DNA in samples taken from 43 patients clinically diagnosis with toxoplasmosis. The antibody of IgG and IgM is looked at among 96 patients with ELISA and IFA tests prepared as in-house. The Sabin Feldman dye test is used as reference test. With ELISA test 55.2% and with IFA test 46.8% of the samples are found positive with IgG antibody. For IgM antibody seropositivity, with ELISA 58.3% and with IFA test 46.8% of samples are found with seropositivity. While positive result has been detected in one with PCR technique, two of five cerebrospinal fluid, four of eleven amnion fluid, one of four cordon blood and two of seven bone marrow, no Toxoplasma DNA was detected in the samples of one aques humour and four lymph tissue biopsy covered with paraffin. As a result, it has been found out that ELISA and IFA test kits which have been formed as in-house through antigens obtained from the same specie worked as good as commercial kits. Thus, it is possible to get more accurate, reliable and economical results in diagnosing the disease. Particulary, in diagnosing toxoplasmosis in immune deficient patients, the shortcoming caused by the failure of serologic tests has been removed by a more advanced method of PCR and it has successfully become routine at hospital.