Ağrı kontrolünde kullanılan benzidamin HCl'ün osteoblast hücreleri üzerindeki etkilerinin hücre kültürü çalışmaları ile değerlendirilmesi

Abstract

Ağrı Kontrolünde Kullanılan Benzidamin HCI'ün Osteoblast Hücreleri Üzerindeki Etkilerinin Hücre Kültürü Çalışmaları ile Değerlendirilmesi Benzidamin HCl (BN) genel tıp ve diş hekimliği alanında sıklıkla kullanılan ağrı kesici ve antienflamatuar etken maddesidir. Bu tez çalışmasında; BN'ün, ortodontik diş hareketlerinin gerçekleşmesi için gerekli kemik yapım ve yıkım faaliyetlerinde başrol oynayan osteoblast hücrelerinin proliferasyonu, diferansiyasyonu ve aktivitesi üzerine etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır.Bu çalışmada mouse calvaria osteblast hücre hattı (MC3T3-E1 subclone 14) kullanıldı. Hücreler pasajlanıp seyreltildikten sonra 24, 48 ve 72. saatler de 10-4 M, 10-5 M, 10-6 M , 10-7 M, 10-8 M ilaç süspansiyonları için MTT testi yapıldı ve çıkan sonuçlara göre IC50 oranı hesaplanarak çalışmanın tamamında 34.3 µM konsantrasyon ilaç kullanımına karar verildi.Doz tespitinden sonra ise 1, 4, 7, 14 ve 21 günlük inkübasyon dönemlerinde hücresel artış ve canlılık XTT ve hücre sayımı metoduyla, osteoblast gelişimde önemli bir belirteç olan alkalen fosfataz (ALP) enzimi; ALP aktivite testi ve histokimyasal olarak ALP boyaması ile değerlendirildi. Osteoblast fenotipinin değerlendirilmesinde kullanılan osteokalsin, osteopontin, alfa 1 kollajenaz, alkalen fosfataz ve çekirdek bağlayıcı faktör alfa 1 genleri RT-PCR ile tespit edildi. Kemik nodülleri ve hücresel mineralizasyonu göstermek için de alizarin red s ve von-Kossa boyamaları yapıldı.Elde edilen bulgular değerlendirildiğinde BN'ün osteoblast hücrelerinin proliferasyonu, diferansiyasyonu ve aktivitesi üzerine olumsuz etkilere sahip olduğu kanaatine varıldı.Anahtar kelimeler:Hücre Kültürü, Benzidamin HCl, OsteoblastDestekleyen kurumlar:Gülhane Askeri Tıp AkademisiYazar Adı:Enver Akın ÖZKANDanışman:Hüseyin ÖLMEZ

Evaluation of the effects of Benzydamine HCl, used in pain control, on osteoblast cells through cell culture study.Benzydamine HCl (BN) is the active ingredient of an anti inflammatory and analgesic drug which is used frequently in general medicine and dentistry. In our study, we aimed at investigating the effects of BN on osteoblasts proliferation, differentiation and activity that play a major role in orthodontic tooth movement through bone apposition and resorption.In this study MC3T3-E1 subclone 14 was used. The cells, after passaging and diluting, were incubated with 10-4 , 10-5 , 10-6 , 10-7 , 10-8 M BN suspension for 24, 48 and 72 hours and MTT test was performed to calculate IC50 value. Based on the result, BN was used at the concentration of 34.3 µM for the rest of the study.After determining the dosage, cells were incubated for 1, 4, 7, 14. and 21 days with BN. Then, XTT and cell couting methods were performed to determine short and long term effects of BN on osteoblast differentiation and activity. Alkaline phosphatase enzyme, which is an important marker for the differentiation of osteoblasts, was measured by ALP activity test and ALP staining histochemicaly. Ostecalcin, osteopontin, alpha 1 collagenase, alkaline phosphatase, core binding factor alpha 1 which are important markers of osteoblast phenotype were assessed by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Alizarin red s and von Kossa staining were performed to determine bone nodules and cellular mineralization.In conclusion, BN had inhibitory effect on all markers tested in this study. Our findings indicate that BN has negative impact on osteoblasts proliferation, differentiation and activity.Keywords:Cell Culture, Benzydamine HCl, OsteoblastSupported by:Gülhane Askeri Tıp AkademisiAuthor:Enver Akın ÖZKANCounsellor:Hüseyin ÖLMEZ