Ratlarda deneysel olarak oluşturulan alerjik konjonktivitte propolisin etkisi

Abstract

Amaç: Deneysel olarak alerjik konjonktivit oluşturulan ratlarda topikal ve gavaj yoluyla uygulanan propolisintedavi etkinliğinin karşılaştırılması amaçlanmıştır.Gereç ve yöntem: Çalışmaya Wistarırkı, 20-22 haftalık, 200-250g ağırlığında, sağlıklı 65 adet dişi rat alındı. Deney hayvanları, intrakardiyak kanları alındıktan sonra randomize 7 gruba ayrıldı.Birinci grup (PR-OR): Propolis-gavaj (10 adet rat), ikinci grup (PR-TOP): Topikal propolis (10 adet rat), üçüncü grup (PAT):Topikal antihistaminik (olopatadine) (10 adet rat),dördüncü grup (KS):Topikal kortikosteroid (10 adet rat), beşinci grup (AK): Alerjik konjonktivit (10 adet rat), altıncı grup (ZYT): Zeytinyağı, yedinci grup (SHAM): Sham-Kontrol (5 adet rat) olarak belirlendi. Sham grubu hariç diğer grupların hepsine ovalbümin intraperitoneal (1. ve 7. gün) ve topikal yolla (günaşırı 14 gün süreyle) uygulanarak ratlar sensitize edildi. Çalışmanın 15. gününden itibaren hergün gruplara ilgili maddeler 29. güne kadar verildi. Çalışmanın 29. gününde tüm ratlar intrakardiyak kanları tekrar alınıp sonra sakrifiye edilerek konjonktiva dokuları histopatolojik olarak,servikal lenf nodları mikrobiyolojik (flowsitometri, elisa) olarak incelendi. Çalışma öncesi ve çalışma sonrası tüm ratlardan serum total IgE ve ovalbumin spesifik IgE çalışıldı. Ayrıca tüm çalışma boyunca ratların konjonktival semptom skorları kaydedildi.Bulgular: Çalışma boyunca tüm grupların konjonktival semptom skorları değerlendirildiğinde, AK grubu hariç diğer gruplarda iyileşme gözlendi. H&E bulgularına göre, ödemin AK grubunda şiddetli, ZYT grubunda ise KS grubu kadar azalmış olduğu görüldü. Konjesyon tüm gruplarda hafif düzeyde benzer bulundu. İnflamatuar hücre düzeyinin ise KS grubunda yok denecek kadar baskılandığı ve PR-TOP grubunda, PR-OR grubuna göre daha fazla azaldığı gözlendi.İmmünohistokimyasal olarak NF-κB ekspresyonu yoğunluğu ve yaygınlığı incelendiğinde, AK grubuna göre Sham, PAT ve PR-OR grubunda istatistiksel olarakanlamlı zayıf belirlendiği (p<0.05), AK grubu ile ZYT, KS ve PR-TOP grubu kıyaslandığında ise istatistiksel olarak anlamlı fark bulunamadığı görüldü (p>0,05).Flowsitometrik olarak IL-4 ve IL-17 üreten adaptif hücre düzeyi yüzde olarak incelendiğinde anlamlı fark bulunamazken, hücre sayısı olarak incelendiğinde ise, her analizde PR-OR grubunda hücre sayısının, AK grubu hariç PR-TOP ve diğer gruplara göre anlamlı fazla olduğu bulundu (p<0.05).Bu da PR-OR grubunda hücre sayısı baskılanmadan antialerjik etkinliğin ortaya çıkmış olabileceğini düşündürmektedir.Sonuç: Propolisin hem topikal hem gavaj yoluyla uygulanmasının OVA uygulaması sonrasında oluşan alerjik konjonktivit tedavisinde etkili olduğu bulunmuştur. Propolisin gavaj yoluyla uygulanmasının, hücre sayısını koruyarak immunmodulatuvar etkisi olduğu gösterilmiştir. Propolisin alerjik konjonktivitli hastalar üzerinde objektif semptomlar üzerinden araştıran kontrollü klinik çalışmalara ihtiyaç vardır.Anahtar Kelimeler:Konjonktivit, Alerjik, Hayvan Modeli, Deneysel, Propolis, Ovalbümin, Rat, Kortikosteroid.

Objective: The aim of this study was to investigate whether propolis given topical or via gavage has any treatment effect in an experimental model of allergic conjunctivitis in rats.Material and method: The study conducted on 65 female Wistar rats, aged 20-22 weeks (weighing 200-250 g). After intra-cardiac blood samples were drawn, rats were randomly divided into 7 groups as follows; group 1 (PR-OR): propolis-gavage (10 rats); group 2 (PR-TOP): topical propolis (10 rats); group 3 (PAT): topical antihistaminic (olopatadine) (10 rats); group 4 (KS): topical corticosteroid (10 rats); group 5 (AK): allergic conjunctivitis (10 rats); group 6 (ZYT): olive oil (10 rats); group 7 (SHAM): sham-control (5 rats). Rats were sensitized by intraperitoneal ovalbumin (1.and 7. days) and topically (on alternate days for 14 days) in all groups except sham group. From the 15th day of the experiment, the group specific substances were daily given to the rats until the 29th day. On the 29th day of the experiment, intra-cardiac blood of all rats were taken again and then sacrificed and conjunctiva tissues were histopathologically examined and cervical lymph nodes were microbiologically (flowcytometry, elisa) investigated. Serum total IgE and ovalbumin specific IgE were studied in all rats before and after the experiment. Conjunctival symptom scores of the rats were also recorded throughout the experiment.Findings: When the conjunctival symptom scores of all groups were evaluated during the experiment, improvement was observed in all groups except AK group.According to the H&E findings, there was a severe edema in the AK group, but edema was reduced in the ZYT group to the level observed in the KS group. Congestion was found mild in all groups. The inflammatory cell level was suppressed to almost zero in the KS group and reduced at a much higher level in the PR-TOP group compared to the PR-OR group (p <0.05).When the intensity and the frequency of NF-κB expression were immunohistochemically examined, these levels were significantly weak (at 5% significance level) in Sham, PAT and PR-OR groups compared to AK group(p<0.05); but there was no statistically significant difference (p>0,05) in ZYT, KS and PR-TOP groups compared to AK group.The levels of IL-4 and IL-17 producing adaptive cells were analysed with flowcytometry in two ways. When analysed in terms of percentages, no statistically significant difference is found (p>0,05)). When analysed in terms of absolute cell numbers, the number of cells in the PR-OR group was found to be significantly higher (p<0.05)than the PR-TOP group and other groups except for the AK group each time.Conclusion: Both topical and gavage application of propolis has been found to be effective in the treatment of allergic conjunctivitis following OVA administration. Administration of propolis by gavage has been shown to have immunomodulatory effect, preserving cell count. There is a need for controlled clinical trials that investigate the effects of propolis on objective symptoms in patients with allergic conjunctivitis.Keywords:Conjunctivitis, Allergic, Animal Model, Experimental, Propolis, Ovalbumin, Rats, Corticosteroid.