Servikal sürüntü örneklerinde PCR yöntemiyle Human papillomavirus varlığının araştırılması ve tiplendirilmesi

Abstract

Amaç: Konya bölgesinde HPV prevalansı, tipleri ve bunların bazı demografik faktörlerle ilişkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Çalışmamıza Mayıs 2010 2011 tarihleri arasında Selçuk Üniversitesi Meram Tıp Fakültesi Hastanesi ve Konya Dr. Faruk Sükan Doğum ve Çocuk Hastanesi Kadın Doğum Polikliniklerine başvuran 21-81 yaşları arasındaki cinsel yönden aktif 180 hasta dahil edildi. Hastalardan rutin jinekolojik muayene sırasında Pap smear ve HPV DNA testi için servikal sürüntü örneği alındı. Pap smear testi için örnekler Papanicolaou boyası ile boyanıp Bethesda 2001 terminoloji sistemi esas alınarak değerlendirildi. HPV DNA saptanması için Stuart's taşıyıcı besiyerine (Copan, İtalya) alınan sürüntü örnekleri Mikrobiyoloji Laboratuvarı'nda çalışma yapılıncaya kadar -20 °C'de saklandı. High Pure Viral Nucleic Asid kiti (Roche Diagnostics, Mannheim, Almanya) ile DNA izolasyonu yapıldı. INNO-LİPA HPV Genotyping Extra Amp (INNOGENETICS N. V., Belçika) kiti ile amplifikasyon yapıldı. PCR amplikonları nitrosellöz banttaki yakalayıcı spesifik oligonükleotid proplara hibridize edildikten sonra INNO-LİPA HPV Genotyping Extra Okuma Kartı yardımıyla sonuçlar değerlendirildi.Bulgular: Hastaların % 18,9'unda (n=34) HPV DNA pozitif bulundu. En sık görülen tipler sırasıyla tip 16 (%20.8) ve tip 51 (%20.8), tip 6 (%12.6), tip 53 (%8.3) ve tip 52 (%8.3) olmuştur. Hastaların medeni durumu ve ilk cinsel ilişki yaşı ile HPV DNA pozitifliği arasında istatiksel olarak anlamlı bir ilişki saptandı (p<0.05). Smear sonuçlarının dağılımı ise şu şekildeydi; 92 hasta (%51,1) normal, 71 hasta (% 39,4) ASCUS, 4 hasta (% 2,2)AGUS, 3 hasta (% 1,7) ASC-H, 2 hasta (1,1) LSIL, 2 hasta (% 1,1) HSIL idi. Artan smear derecesi ile HPV DNA pozitiflik oranının arttığı görüldü.Sonuç: Servikal neoplazilerle yakından ilişkili olan HPV infeksiyonlarının tanısında PCR yöntemleri hızlı, kolay ve güvenilir yöntemlerdir. Bu açıdan risk taşıyan kişilerin belirlenmesi ve uygun klinik yaklaşımın belirlenebilmesi için HPV tanı testleri Mikrobiyoloji Laboratuvarı'nda rutin olarak kullanılmalıdır. HPV prevalansı ve tiplerinin dağılımını belirleyen bölgesel çalışmalar yapılacak aşı çalışmalarına katkıda bulunacaktır. Anahtar kelimeler: Human Papillomavirus, PCR, Pap smear testi, DNA.

Objective: It was aimed to determine the prevalance of HPV, type distribution in Konya region and to investigate the relationship between these results and sociodemographic factors.Materials And Methods: Between May 2010-2011 sexual active in 21-81 age groups 180 patients applying to Obstetrics and Gynecology Clinics of Selcuk University Meram Medical Faculty Hospital and Konya Dr. Faruk Sükan Child and Woman Hospital were included in this study. Cervical swap samples were collected for Pap smear and HPV DNA test during routine gynecological examination. For Pap test, these samples were stained with Papanicolaou and cytological examination were performed according to the Bethesda 2001 classification. Cervical samples were obtained with Stuarts transport medium (Copan, Italy) and stored at -20°C in deepfreeze in Microbiology Department until molecular test of HPV DNA was carried out. DNA isolation were performed with High Pure Viral Nucleic Asid (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) and amplification with INNO-LİPA HPV Genotyping Extra Amp (INNOGENETİCS N. V., Belgium) kit.PCR amplicons were hybridized with specific oligonucleotide probes and the results were evaluated by using the INNO-LiPA HPV Genotyping Extra Reading Card.Results: HPV DNA was detected in % 18,9 (n=34) of cases. The most frequent genotypes were HPV 16 (%20.8), HPV 51 (%20.8), HPV 6 (%12.6), HPV 53 (%8.3) and HPV 52(%8.3). The marital status and age at the first sexual intercourse of patients were found to be statistically significant with HPV DNA positivity (p<0.05). According to cytologic category 71 (% 39.4) patients had ASCUS, 4 (% 2.2) had AGUS, 3 (% 1.7) had ASC-H, 2(% 1.1) had LSIL and 2 (% 1.1) had HSIL. 92 (% 51.1) patients were with normal cytology. We observed that the prevelance of HPV DNA was increased according to the severity of the cytologic category.Conclusion: PCR assays were found to be rapid, easy and reliable methods and, used in the diagnosis HPV infections closely related with cervical neoplasia. These tests should take place among the routine diagnostic procedures at clinical microbiology laboratories to detect risk group and to appropriate clinical approach. The studies that determine HPV prevalance and type distribution in our region might contribute the vaccine trials.Key words: : Human Papillomavirus, PCR, Pap smear test, DNA.