Shabut (Barbus grypus) balığının karaciğer dokusundan Glutatyon S transferaz enziminin saflaştırılması ve bazı metal iyonlarının inhibisyon etkisinin in vitro şartlarda araştırılması

Abstract

Bu tez çalışmasında, Glutatyon S transferaz enziminin saflaştırılması iki aşamada gerçekleştirildi. Shabut (B. grypus) balığının karaciğer dokusundan hazırlanan homojenat glutatyon-agaroz afinite kromatografisine uygulanarak tek basamakta %38,41 verimle 45,52 kat saflaştırıldı. Enzim saflığı SDS-PAGE ile kontrol edildi. Shabut (B. grypus) karaciğer GST enzim aktivitesi üzerine bazı metal iyonlarının (Na+, Mg2+, K+, Ca2+, Fe3+, Zn2+, Cr3+, Co2+, Mn2+, Cu2+, Pb2+) inhibisyon etkileri in vitro şartlarda araştırıldı. Na+, Zn2+, Co2+, Cu2+ ve Pb2+ metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerinde inhibisyon etkisi gösterdiği belirlendi. İnhibisyon etkisi gösteren metal iyonları için IC50 değerleri sırasıyla 1,6707, 3,0131, 0,2911, 0,4709 ve 0,6052 mM, Ki sabitleri ise Na+, Cu2+ ve Pb2+ için sırasıyla 0,7024±0,2034, 0,2223±0,1271 ve 0,6835±0,1801 mM olarak tespit edildi. Shabut (B. grypus) balığının yaşadığı su kaynaklarında (Botan-1, Botan-2 ve Kezer) metal birikimi ICP-OES cihazıyla incelendi. En yüksek tespit edilen metal iyonunun Ca2+, Mg2+ ve K+ olduğu ve Botan-2 lokasyonunda Ca2+, Mg2+ ve K+ konsantrasyonu sırasıyla 109,6 mg/L, 29,900 mg/L ve 3,544 mg/L olarak belirlendi.

Purification of the glutathione S transferase enzyme was carried out in two steps. The homogenate prepared from the liver tissue of Shabut fish (B. grypus) was applied to glutathione agarose affinity chromatography and purified 45.52 times in a single step with 38.41% yield. Enzyme purity was checked by SDS-PAGE. The inhibition effects of some metal ions (Na+, Mg2+, K+, Ca2+, Fe3+, Zn2+, Cr3+, Co2+, Mn2+, Cu2+, Pb2+) on Shabut (B. grypus) liver GST enzyme activity were investigated in vitro. It was determined that Na+, Zn2+, Co2+, Cu2+ and Pb2+ metal ions had an inhibition effect on enzyme activity. IC50 values for metal ions showing inhibition effect were found 1.6707, 3.0131, 0.2911, 0.4709 and 0.6052 mM respectively Ki constants were found 0.7024±0.2034, 0.2223±0.1271 and 0.6835±0.1801 mM for Na+, Cu2+ and Pb2+, respectively. Metal accumulation in the water resources (Botan-1, Botan-2 ve Kezer) of the Shabut fish (B. grypus) was examined with the ICP-OES device. It was determined that the highest metal ion detected was Ca2+, Mg2+ and K+. It was determined that Ca2+ 109.6 mg/L, Mg2+ 29.900 mg/L and K+ 3.544 mg/L at Botan-2 location.