Sığır serum ve eritrositlerinden saflaştırılan asetilkolinesteraz enzimi üzerine bazı pestisitlerin inhibisyon kinetiklerinin araştırılması

Abstract

oz Sığır serum ve eritrositlerinden afinite kromatografisi yöntemiyle saflaştınlan asetilkolinesteraz enziminin saflaştırma oranlan bulunmuştur. Bu amaçla ilk önce, 4 materyalin herbirinin spesifik aktiviteleri tesbit edilmiştir. Bu 4 materyal; ham sığır serumu, ham sığır eritrositi, sığır serum asetilkolinesterazı ve sığır eritrosit asetilkolinesterazıdır. Spesifik aktivitelerden saflaştırma oranlan saptanmıştır. Sığır serum asetilkolinesterazı için saflaştırma oram 4301, sığır eritrosit asetilkolinesterazı için ise 43 79. 3 'dür. Sığır serum ve eritrositlerinden saflaştınlan asetilkolinesteraz üzerine pestisitlerden; Endosülfan, 2.4-D, Metil parathion, Malathion, Meothrin, Baythroid, TCA ve Linuon'un etkileri araştınldı. Adı geçen bütün kimyasalların bu enzim üzerine inhibitor etkileri olduğu bulundu. Gerek sığır serumu ve gerekse sığır eritrosit asetilkolinesteraz enzimi üzerine bu pestisitler tek tek uygulanarak logaritma % aktivite-zaman grafikleri çizilip, bu grafiklerin eğimleri bilgisayarda MICROSOFT EXCEL 5.0 hazır programıyla hesaplanmıştır. Bulunan bu değerler (Kj=2.303. Eğim/I) denkleminde yerine yazılarak Kj değerleri, (l50=0.693/Ki.t) denkelminde yerine yazılmasıyla da I50 değerleri bulunmuştur. Sığır serum asetilkolinesterazı için K; değerleri sırasıyla; 0.302xl03 mol`1 dak`1, 0.087xl02 mol`1 dakr1, 0.60xl02 mol`1 dakr1, 0.12xl02 mol`1 dair1, 0.867x1 03 mol`1 dak`1, 0.367xl03 mol'1 dak`1, 0.03xl02 mol`1 dak-1 ve 0.106x1 03 mol`1 dak`1 dir. I50 değerleri ise sırasıyla; 2.29xl0`3 M, 7.96xl0`2 M, 1.16xl0`2 M, 5.78xl0`2 M, 8.0X10`4 M, 1.89xl0`3 M, 0.231 M ve 6.54x1 0`3 Mdır. Sığır Eritrosit asetilkolinesterazı için Kj değerleri sırasıyla; 0.208xl03 mol`1 dak`1, 0.141xl03 mol`1 dakr1, 0.22xl02 mol`1 dak`1, 0.073xl02 mol`1 dak`1, 0.53xl03 mol`1 dak`1, 0.461x1 03 mol`1 dak`1, 0.01 lxlO2 mol`1 dak`1 ve 0.145x1 03 mol-1 dak`1 dir. I50 değerleri ise sırasıyla; 3. 33x1 0`3 M, 4.91xl0`3 M, 3.17xl0`2 M, 9.49xl0`2 M, 1.30xl0`3 M, 1.50xlO`3 M, 0.63 M ve 4.78xlO`3Mdu-.

ABSTRACT The purification rates of the acetylcholinesterase enzyme, which was purified from bovine serum and erythrocyte with aid of the affinity chromatography method were determined. Firstl, the specific activities of each of 4 materials were found. These 4 materials consisted of raw bovine serum, raw bovine erythrocyte, bovine serum acethlycholinesterase and bovine erythrocycthe acethylcholinesterase. The purificaion rates have been found from specific astivities. The purification rate for bovine serum acethylcholinesterase is 4301 and the rate for bovine erythrocyte acethylcholinesterase is 4379.3. The effects of pesticides, Endosulfan, 2.4-D, Methyl parathion, Malathion, Meothrin, Baythroid, TCA and Linuron upon acethylcholinesterase purified from bovine serum and erythrocyte were investigated. It was found out that the above mentioned chemicals had inhibiting effects upon this enzyme. These pesticides were implanted on both bovine serum and bovine erythrocyte acethylcholinesterase enzym one by one; logarithm %activity - time (min) graphs were drawn, the soleps of these garphs have been calculated by the computer rogramme, MICROSOFT EXCEL 5.0. We have found the Kj values by writing the values of slopes found in the equation, Kj=2.303xSlope/I. We have also found the I50 values by writing the Kj values in the equation l5o=0.693/Kj x t. The Kj values or bovine serum acethylcholinesterase are; 0.302xl03 moH min`1, 0.087xl02 moF min`1, 0.60xl02 moH min`1, 0.12xl02 mol`1 min`1, 0.867xl03 moH min`1, 0.367xl03 moF min`1, 0.03x1ü2 mol`1 min`1 and 0.106xl03 mol-1 min-1 respectively. The values for I50 are; 2.29xl0`3 M, 7.96xl0`2 M, 1.16x10-2 M, 5.78xl0`2 M, 8.0x1ü-4 M, 1.89xl0-3 M, 0.231 M and 6.54xl0-3 M respectively. Kj values for erythrocyte acethlycholinesterase are; 0.208xl03 mol`1 min`1, O.HlxlO3 mol`1 min`1, 0.22xl02 mol`1 min`1, 0.073x1 02 mol-1 min`1, 0.53xl03 mol`1 min`1, 0.461xl03 mol`1 min`1, 0.01 lxlO2 mol`1 min`1 and 0.145xl03 mol`1 min'1 respectively. I50 values are; 3.33xl0-3 M, 4.91xl0-3 M, 3.17xl0`2 M, 9.49xl0`2 M, 1.30xl0-3 M, 1.50xl0`3 M, 0.63 M and 4.78xl0`3 M respectively.