İnci kefali (Chalealburnus torichi, pallas, 1881) eritrositlerinden afinite kromatografisi ile saflaştırılan karbonik anhidraz enziminin kinetik ve elektroforetik özelliklerin incelenmesi

Abstract

VIII öz İnci kefali Chalcalbumus tarichi eritrositlerinden. 0.1 M NaCI-^COO /0.5M NaClC>4 elüsyon tamponu ile Separose 4B-L tirozin-Sulfanilamid afınite jeli kullanılarak saflaştırıldı. Saflaştırma derecesi 383 kat olarak bulundu. Saflaştırma SDS poliakrilamid jel elektroforezi ile kontrol edildi ve elektroforetik olarak farklı bir izoenzime rastlanmayarak tek bir bant elde edilmiştir. Km değerleri CO2 için 7.5 mM. p-nitrofenilasetat için 17 raM olarak tespit edilmiştir. Vmax değerleri ise CCb için 80 U mi. min. ve p-nitrofenilasetat için 27 U mi. min olarak bulundu. Enzim p-nitrofenilasetata oranla CCVe karşı daha yüksek aktiviteye sahiptir. Chalcalbumus tarichi balığı üzerinde çalışılan inhibitörlerin I5Q değerleri ile % aktivite-[I] diyagramlarıyla belirlendi. Bu değerler sırasıyla: asetazolamid. 7.6 xl0`6 M. sülfanilamid 1.32 xlO°M. 2.4-dichloro-5-sulfamoil benzoik asit. 6. nxlO'^M. 3-sulfamoil benzoik asit 1.47 xl0~ 5 M. NaN3 2.06 xl0'5 M. NaCIO4101 xl0`5 M.NaCN 97 xl0`5 M. olarak tesbit edilmiştir.

VII ABSTRACT Chalcalkurmıs tarichi fish {Chalcalburmis tarichi, pallas) carbonic anhidrase from erythrocytes was purified by using the afinitiy gel (Sepharose 4B-L-tyrosine-sulfanilamide) with elution buffer of 0.1M NaCH3COO /0.5M NaC104( pH=5.6). There was a 383-fold purification of Chalcalburmis tarichi fish carbonic anhydrase. The purification was controlled with a SDS- polyacrylamide gel electrophoresis. The pure enzyme migrated as a single band, indicatiting the absence of any significant amount of electrophoretically distinct isozymes. The Km values were found to be 7.5 mM for CCb and 17 mM for p-nitrophenylacetate.Vmax values were also found to be 80 U ml. min.and 27 U ml. min for CO? and p-nitrophenlyacetate respectively. The enzyme has a relatively high affinity towards CCb than p-nitrophenlyacetate. The I50 /`alues of inhibitors studied on Chalcalburmis tarichi fish were determined by means of activity percentage [I] diagrams. The values were 7.6 xlO'6 M. 1.32 xlO`5M. 6.12x10`%. 1.47 xlO`5 M. 2.06 xlO'3 M. 1.01 xl0`3 M. 9.7 xl0`4 M. for acetazolamide. sulfanilamide 2,4-dichloro-5-sulfamoil benzoic acid. 3-sulfamoil benzoic acid. NaN3- NaCI04 and NaCN.respectively.