17?-etinilestradiol ve nonilfenole maruz bırakılan inci kefalinde (Chalcalburnus tarichi Pallas, 1811) toksisiteye bağlı bazı değişimlerin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, 17 ? -etinilestradiol (EE; 1, 10 ve 100 ng/l) ve nonilfenolün (NP; 10, 60 ve 200 ? g/l) nominal konsantrasyonlarına, semistatik koşullarda kronik olarak (32 gün) maruz bırakılan inci kefalinde karaciğer ve gonad apoptozu, gonad histopatolojisi, plazma steroid seviyeleri ve karaciğerde CYP1A enziminin immunohistokimyasal lokalizasyonu araştırıldı. Bunun yanında 24 saat süre ile EE ve NP'nin 0.1, 1 ve 10 ? M konsantrasyonları ile inkübe edilen kültürü yapılmış inci kefali karaciğer hücrelerinde, apoptotik hücre ölümü, flow sitomeri ile analiz edildi. Apoptoz, histolojik kesitlerde TUNEL metodu ile değerlendirildi. EE ve NP'nin karaciğerde hepatosit ölümünü, ovaryumda folikül başına düşen apoptotik somatik hücre sayısını ve testisde seminifer tübül başına düşen apoptotik germ hücre sayısını konsantrasyon artışı ile birlikte artırdığı ve bu artışların en yüksek konsantrasyonlarda istatistiksel olarak anlamlı olduğu gözlendi. EE ve NP uygulanan gruplarda ovaryum yüzde atretik oosit sayısının arttığı ancak bu artışın NP uygulanan gruplarda istatistiksel olarak anlamlı olmadığı belirlendi. Ovaryumda stromal bağ dokuda kalınlaşma da belirlendi. Testiste ise intersititiyal bağ dokuda kalınlaşmanın yanı sıra ovotestis gözlendi. NP ve EE uygulanan gruplarda plazma 17 ? -östradiol seviyeleri değişim göstermedi bununla birlikte plazma testosteron seviyeleri EE'nin 100 ng/l konsantrasyonunda hem dişi hem de erkek bireylerde belirlenemedi. Karaciğerde CYP1A enziminin immunohistokimyasal lokalizasyonunda NP uygulanan gruplarda kontrol bireylerine kıyasla bir fark gözlenmezken, EE uygulanan gruplarda hepatosit sitoplazmasında CYP1A immunboyanmasının, nukleus memranından plazma membranına doğru arttığı gözlendi ancak boyanmanın orta şiddetli olduğu belirlendi. EE ve NP'nin hepatosit kültürlerinde hücre ölümünü anlamlı olarak artırmadığı gözlendi. Bu sonuçlar, EE ve NP'nin inci kefalinde in vivo'da toksik etkiye sahip olduğunu göstermektedir.

In the present study, liver and gonadal apoptosis, gonad histopathology, plasma steroid levels and immunohistochemical localization of CYP1A enzyme were investigated in Chalcalburnus tarichi, chronically (32 days) exposed to nominal concentrations of 17 ? -ethinylestradiol (EE; 1, 10 ve 100 ng/l) and nonylphenol (NP; 10, 60 ve 200 ? g/l) at semistatic conditions. Furthermore apoptotic cell death was analyzed by flow cytometer in cultured liver cells of C. tarichi incubated 24 h with 0,1, 1 and 10 ? M concentrations of EE and NP. Apoptosis was evaluated in blinded histological sections by TUNEL method. EE and NP were observed to increase hepatocyte death, apoptotic somatic cell number per follicle in ovary and apoptotic germ cell number per seminiferous tubule in testis along with concentration rising and these increases were statistically significant at the highest concentrations. Percentage of atretic oocyte number in ovary was determined to increase in EE and NP exposed groups however not significant in NP exposed groups. Thickening of stromal connective tissue was also observed in ovary. In testis, thickening of interstitial connective tissue as well as ovotestis were observed. Plasma 17 ? -estradiol levels did not change in either EE or NP exposed groups however, plasma testosterone levels were not detected in both females and males at 100 ng/l EE concentration. In liver, while no difference was observed in immunohistochemical localization of CYP1A enzyme of NP exposed groups compared to controls, CYP1A immunstaining was observed to increase in hepatocyte cytoplasm, extending from nuclear membrane to plasma membrane but moderate staining was determined in EE exposed groups. EE and NP did not significantly induce cell death in hepatocyte cultures. These results show that in vivo exposure to EE and NP have toxic effects on C. tarichi.