Dismorfik ve normal oositlerden elde edilen embriyoların sayısal aneuploidi oranlarının ve embriyo gelişim skorlarının karşılaştırılması

Abstract

Amaçİyi kalitede ve kromozomal olarak hayatla bağdaşan embriyo elde edilebilmesinin en önemli etkenlerinden biri oosit kalitesidir.Bu nedenle embriyo skorlamasının ilk aşamasını oositlerin morfolojik anomali sınıflandırmaları oluşturur.Bu çalışmada morfolojilerine göre sınıflandırılan oositler ve bu oositlerden elde edilen embriyolara yapılan polar cisimcik ve blastomer biyopsi sonrası kromozomal anomali sonuçlarına göre oosit morfolojik anomalilerinin önemi ve preimplantasyon genetik tanı açısından endikasyon oluşturabilme olasılıkları tartışılmıştır.Materyal ve MethodAlman Hastanesi ve Ankara Centrum Tüp Bebek merkezlerinde 2010 mart ayı ve 2015 mayıs ayı arasında tedavi görmek için başvurmuş 279 pgt uygulanmış hasta çalışmaya dahil edilmiştir. Hastalar 38 yaş altı olgu gruplarından seçilmişlerdir.Hastalarda tekrarlayan implantasyon başarısızlığı (en az 2 an fazla 4 tekrarlayan başarısız denemeler) gözlenmiş ve preimplantasyon genetik tanı eşliğinde ıvf tedavisi planlanmıştır. Embriyo gelişiminin 1. Gününde polar cisimcik biyopsisi (n=134) ve 3.gününde blastomer biyopsi (n=776) uygulamak üzere FISH (Fluorescence In Situ Hybridisation) tekniği ile blastomerlerin değerlendirmeleri yapılmıştır. Embriyolardan 3. Ve 4. Günde en fazla 1 blastomer alınmak suretiyle biyopsi uygulanmıştır, 2 raund çalışma yapışmış ve şu problar taranmıştır: 13,15,16,17,18,21,22,X,Y.Farklı oosit morfolojilerinden gelişen embriyoların biyopsi sonrası kromozomal kurulumlarının nasıl etkilendiği ortaya konulmuştur.Oositler morfolojilerine göre 4 ayrı gruba ayrılmak suretiyle değerlendirilmişlerdir.GRUP I: Normal oosit morfolojisinden gelişen toplam 1817 embriyonun preimplantasyon genetik tanımlama sonrası elde edilen sonuçlara yer verilmiştir ve grup kontrol grubu olarak değerlendirilmiştir.GRUP II: Homojen ve merkezi olarak granülasyon gösteren yada sitoplazmasında reflaktil cisimcik içeren oosit oosit morfolojisinden gelişen toplam 387 embriyonun preimplantasyon genetik tanımlama sonrası elde edilen sonuçlara yer verilmiştir.GRUP III: Perivitaline ve zona anomalileri içeren sitoplazma dışı dismorfik sorunları olan oosit morfolojisinden gelişen toplam 508 embriyonun preimplantasyon genetik tanımlama sonrası elde edilen sonuçlara yer verilmiştir.GRUP IV: Bunların dışındaki anomalileri içeren oosit morfolojisinden gelişen (sitoplazmik vakuolizasyon, smooth endoplazmic retikulum-düz endoplazmik retikulum aglitasyonu, düzensiz oelemma gibi) toplam 193 embriyonun preimplantasyon genetik tanımlama sonrası elde edilen sonuçlara yer verilmiştir.İstatiksel analizler Pierson cooelation analysis kullanılarak yapılmıştır.BulgularGrup 4'te bulunan vakuolizasyon ve düz endoplazmik retikulum aglitasyonu gözlenen grupta embriyo biyopsi sonrası kromozomal değerlendirmelerine bakıldığında gruplar arası anomali oranlarında 4. Grupta anlamlı aneuploidy ranına rastlanmıştır. (GrupI,GrupII,GRUPIII ve Grup IV) (%41,3,%43,1,%50,5 ve %71,4* ) (*p<0,01).TartışmaSitoplazmik vakuollerin sıvı dolu ölü alanlar olduğunu düşünürsek özellikle vakouol sayısı ve büyüklüğüne göre oositin içerdeği flament, organel ve kromozomal materyalleri dışında bırakmakla birlikte sitoplazmik devinim sırasında metamorfik değişim ve bölünme döngülerine negatif olarak yansıdığı ve mitotik devinimlerde hasara yol açtığı ortaya konmuştur. Özellikle bu bölünme proplemleri kutup cisimcik kromozomal değerlendirmesi değilde blastomer biyopsi değerlendirmesi sonrası gözlenen yüksek anomali oranlarını açıklamaktadır.Bu çalışma özellikle sitoplazmik vakuolizasyon ve endoplazmik retikulum aglitinasyonu gösteren oositlerden elde edilen embriyolarda yüksek oranda kromozomal aneuploidi gözlendiğini ve bu özelikteki gamet eldesinin yardımcı üreme teknikleri uygulamalarında bir preiplantasyon genetik tanı endikasyonu oluşturduğunu göstermektedir.

Aim Oocyte quality is one if the most important criteria to get a good quality and chromosomally normal embryos because of this reason the first part of the oocyte scoring is composed of grouping oocyte according to their morphology. In this study, not only the importance of oocyte morphology abnormalities after polar body and blastomer biopsies of embryos but also the possibility of indiction generation for preimplantation genetic diagnosis have been discussed.Material and Methods279 patients, who have applied Istanbul Alman Hospital and Ankara Centrum IVF for ivf procedure, are the subjects of this study. Each patient was undergone pdg and they were under 38. Repetitive implantation failure is common for all subjects (minimum 2 maximum 4 repetitive failures). Their ivf treatment was planned with simultaneous preimplantation genetic diagnosis. Blastomer evalution was done with FISH (fluourescent in situ hybridization) after day 1 polar body (n=134) and day 3 blastomer (n=776) biopsies. Biopsy was done by taking maximum one blastomer from day 3 and 4 embryos. The second turn of this biopsy procedure was done for probe examination and these were used: 13. 15. 16. 17. 18. 21. 22. X. and Y chromosome probes. The effect of different oocyte morphologies on chromosomal features of resultant embryos. Oocytes were divided into four groups. Group I: This group is defined as the control group and it includes 1817 embryos which are resultant of oocytes that had normal morphologies. Each embryo was undergone the preimplantation genetic diagnosis and their results were examined. Group II: It includes 387 embryos which are resultant of homogen and central granulation observed oocytes and cytoplasmic reflactile body contained oocytes. Each embryo was undergone the preimplantation genetic diagnosis and their results were examined. Group III: It includes 508 embryos which are resultant of oocytes that had perivitelline and zona abnormalities and dysmorphic morphological problems on the outside of their cytoplasm. Each embryo was undergone the preimplantation genetic diagnosis and their results were examined. Group IV: It includes 193 embryos which had other abnormalities besides above ones (cytoplasmic vacuolization, smooth endoplasmic reticulum agglutination, irregular oolemm, etc.). Each embryo was undergone the preimplantation genetic diagnosis and their results were examined. Statictical analysis was done by using Pearson Correlation analysis.ResultsAfter the chromosomal examination of embryo biopsies was done, group IV, which contains cytoplasmic vacuolization and smooth endoplasmic reticulum agglutination, have a higher aneuploidy rate among all experimental groups (Group I: 41.3%; Group II: 43.1%; Group III: 50.5%; Group IV: 71.4% and p<0.01). DiscussionCytoplasmic vacuoles can be considered as dead parts that are full of liquid and they do not intake filaments, organelles, and chromosomal materials that are included by oocytes. Especially number of cytoplasmic vacuoles have a negative impact on metomorphic alterations during cytokinesis and cell division cycles also it harms mitotic cell cycles. These cell division distruptions explain higher abnormality rates of blastomer biopsy examination but not chromosomal evaluation of polar body.This study shows that embriyos which are developed from oocytes have cytoplasmic vacuoles and endoplasmic reticulum agglutination have chromosomal aneuploidy in higher rates. Additionally, it demonstrates gametes have these abnormalities result in a pre- implementation genetic diagnosis in assistes reproduction terchniques.Key words: Oocyte dysmorphism, PDG.