İn - vitro fertilizasyon ve embriyo transferi sikluslarında folikül sıvılarında anti-müllerian hormon (AMH) düzeyleri ile oosit, embriyo kalitesi ve gebelik sonuçları arasındaki ilişki

Abstract

ÖZETOvaryum rezervi için önemli bir belirteç olan antimüllerian hormonun doğal kaynağı foliküllerdir. Bu çalışmada folikül sıvısı antimüllerian hormon düzeyinin oosit ve embriyo kalitesi, fertilizasyon ve gebelik üzerine etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır.Çalışma, Ferti-jin Üyte Merkezine 13.11.2014 - 24.06.2015 tarihleri arasında başvuran yaşları 21-42 (ortalama 33.72±4.82) arasında değişiklik gösteren 61 hastanın folikül sıvıları Antimüllerian hormon tayini yapılarak gerçekleştirildi. Foliküler sıvı AMH seviyeleri Roche marka kit ile Roche Cobas e601 otoanalizör yardımıyla ölçüldü (ECLIA). 15 mm üzerindeki foliküllerden alınan folikül sıvıları çalışmada kullanıldı. Bu foliküllerden elde edilen metafaz II oositlere ICSI uygulanarak fertilizasyon gerçekleştirildi. Gelişen embriyolar takip edilerek en iyi kaliteli embriyo seçimi gerçekleştirilerek transfer yapıldı.Folikül sıvısı AMH seviyelerine göre 4 grup oluşturuldu. Bu gruplar; %27,9 ile çok düşük grup (FF AMH= ≤ 1.0 ng/mL, n= 17), % 41 ile düşük grup (FF AMH= 1.0 -2.1 ng/mL, n= 25), %15 ile orta seviye grup (FF AMH= 2.1< X< 3.6 ng/ mL, n= 11) ve %13,1 ile yüksek grup( FF AMH= > 3.6 ng/mL, n=8) şeklindedir. AMH grupları arasında fertilizasyon oranları açısından istatistiksel olarak anlamlı bir fark gözlenmedi (p>0.05). AMH grupları arasında yaş ortalamaları açısından istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunmamaktadır (p>0.05). AMH grupları arasında oosit sayıları açısından istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunmaktadır (p:0.006; p<0.01). Farklılığın hangi gruptan kaynaklandığını saptamak amacıyla yapılan ikili karşılaştırmalar sonucunda; AMH düzeyi çok düşük olanların oosit sayıları, AMH düzeyi düşük (p:0.013), orta (p:0.038) ve yüksek (p:0.004) olanlardan anlamlı şekilde düşük bulunmuştur (p<0.05; p<0.01). AMH düzeyi düşük olanların oosit sayıları, AMH düzeyi yüksek olanlardan anlamlı şekilde düşük bulunmuştur (p:0.043; p<0.05). AMH düzeyi çok düşük olanların M II sayıları, AMH düzeyi düşük (p:0.017), orta (p:0.035) ve yüksek (p:0.002) olanlardan anlamlı şekilde düşük bulunmuştur (p<0.05; p<0.01). AMH düzeyi çok düşük olanların 3.gün iyi kalite embriyo sayıları, AMH düzeyi düşük (p:0.005) ve yüksek (p:0.008) olanlardan anlamlı şekilde düşük bulunmuştur (p<0.05; p<0.01). Diğer gruplar arasında 3.gün iyi kalite embriyo sayıları açısından anlamlı bir farklılık bulunmamaktadır (p>0.05). AMH düzeyi çok düşük olanların indüksiyon ilaçdozları, AMH düzeyi düşük (p:0.001), orta (p:0.005) ve yüksek (p:0.001) olanlardan anlamlı şekilde yüksek bulunmuştur (p<0.01). 35 yaş altı hastaların oosit sayıları ile AMH düzeyleri arasında pozitif yönde, %50.6 düzeyinde ve istatistiksel olarak anlamlı ilişki bulunmaktadır (p:0.002; p<0.01). AMH grupları arasında gebelik oranları açısından istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunmamaktadır (p>0.05).Sonuç olarak; foliküler sıvı antimüllerian hormon düzeyinin oosit ve embriyo kalitesi ile ilişkisi gösterilmiştir. Ancak ICSI fertilizasyon oranlarının foliküler sıvı AMH düzeyleri ile ilişkisi gösterilememiştir. Foliküler sıvı AMH düzeyinin 35 yaş altında bulunan olgularda klinik gebeliği öngörmede bir parametre olabileceği düşünülmektedir.Anahtar kelimeler: Anti-Müllerian Hormon; Foliküler Sıvı; Oosit; Embriyo; Klinik Gebelik; İn-Vitro Fertilizasyon

ABSTRACTFollicules are natural source of circulating AMH levels. AMH has been well studied as good marker of ovarian reserve. Because of controversy in this issue, this study were designed for the measurements of follicular level of AMH and possible relationship with reproductive outcome.A total of 61 follicular fluid (FF) samples from 61 women and 392 MII oocytes were collected from 13.11.2014 to 24.06.2015 (21-42 aged, average 33.72±4.82). In this study FF was obtained from the largest follicle sized ≥15 mm of mean diameter from each ovary during oocyte retrieval, for each patient the same size of FF were pooled. The largest follicle were punctured and aspirated the FF into an empty tube without any flushing media. Samples were collected from only 1 follicle for each ovary and only 1 needle was used for each follicle. Collected samples were centrifuged at 300×g for 15 min and then supernatant was stored at before -20°C after liquid nitrogen, AMH levels in FF measured with Roche kit Roche Cobas e601 autoanalyser electrochemiluminescence immunoassay (ECLIA).Our study investigate the relationship between FF AMH levels and the ensuing oocyte and embryo quality and pregnancy rate. The measurement range was 0.26 -14,05 ng/mL. Samples were divided into 4 groups according to the FF AMH levels: the 27,9% (very low group, FF AMH ≤ 1.0 ng/mL, n= 17), the 41% (low group, FF AMH=1.0-2.1 ng/mL, n=25 ), 15 % (intermediate group, FF AMH= 2.1-3.6 ng/mL, n=11) and 13,1% ( high group, FF AMH= >3.6 ng/mL n= 8). There were no statistically significant differences between AMH groups in terms of fertilisation rates (p>0.05). There were no statistically significant differences between AMH groups in terms of average age (p>0.05). There were statistically differences between AMH groups in terms of number of oocytes (p:0.006; p<0.01). Very low AMH level group oocyte count was significantly lower than other groups respectively (average oocyte count 10,28; 11,82; 15,75) (p<0.05; p<0.01).No. of metafaz II oocyte which is very low AMH levels (p = 0.017) were significantly lower than low (p:0.017), moderate (p = 0.035) and the high (p = 0.002) AMH level groups (p <0.05; p <0.01). Very low AMH level group, day 3 embryo quality were poorer than the others (p<0.05; p<0.01). There were no statistically significant differences among AMH groups in terms of the number of good day 3 quality embryos (p> 0.05). Dose of very low AMH level groups were higher than low (p:0.001), moderate (p:0.005) and high (p:0.001) AMH level groups. There were statistically relationship between AMH levels in terms of number of oocytes under the age of 35, % 50.6 positively (p:0.002; p<0.01).There were no statistically significant differences between AMH groups in terms of clinical pregnancy rates (p>0.05).In conclusion, there are relationship between FF AMH level and the quality of embryo and it has been understood that AMH levels in follicular fluid under the age of 35 has shown to predict pregnancy. But the AMH levels of relationship with ICSI fertilization rates were not shown.Keywords: Anti-Müllerian Hormone; Follicular Fluid; Oocyte; Embryo; Clinical Pregnancy; In-Vitro Fertilisation