İzole teratozoospermi olgularında farklı sperm hazırlama tekniklerinin kromatin kondenzasyon defekti sonuçlarına etkisi

Abstract

İnfertil erkeklerin %85'inde teratozoospermi en önemli patoloji olarak karşımıza çıkmaktadır. Bu hastaların %54'ünde ise ağır derecede izole teratozoospermi etkendir. IVF uygulamalarında önem kazanan bu patolojiler, spermin bir gelişim anomalisi olarak görülür. Ancak sperm olgunlaşmasında büyük önem taşıyan ve paternal DNA'nın paketlenmesinde bir sorun olarak karşımıza çıkan histon-protamin değişimin izole teratozoospermi vakalarında ne düzeyde olduğu bilinmemektedir. Bu düzeyin tespiti ışık mikroskobu düzeyinde anilin mavisi ve toluidin mavisi boyamalarıyla gösterilebilir. Semen hazırlama yöntemlerinin bu hasta grubunda persiste histon düzeylerine ne şekilde etkide bulunduğu çalışmamızın temel amacını oluşturmaktadır. Bu çalışmada izole teratozoospermi tanısı alan 50 bireyin semen numuneleri üç farklı semen hazırlama yönteminden geçirilmiştir (dansite gradient santrifügasyonu, swim-up ve ikisinin kombinasyon). Üç farklı yöntemle elde edilen sperm hücrelerinin persiste histon yüzdeleri, işlenmemiş semen örneğindeki oranlarla karşılaştırılarak hangi yöntemin persiste histonları içeren spermlerin eleminasyonunda daha etkili olduğu değerlendirilmiştir. Buna göre seçilen hasta grubunda işlem görmemiş ejakülatta persiste histon oranı yüzde 21,29 ± 9,53 bulunmuştur. Gradiyent yöntemi kullanılarak elde edilen spermatozoonlarda bu oran yüzde 19,10 ± 9,33 olarak değerlendirilmiş ve işlem görmemiş ejakülattaki (bazal) orana göre iyileşme tespit edilmesine rağmen istatistiksel olarak anlamlı bulunmamıştır. Swim-up yöntemi ve gradient+swim-up yöntemi kullanıldığında persistan histon oranlarındaki azalma farkı anlamlı bulunmuştur (persiste histon yüzdesi sırasıyla, %17,64 ± 8,44 ve %16,22 ± 9,06) (bazal ile ortaya çıkan fark sırasıyla, %3,65 ± 8,93 ve %5,07 ± 9,33, p-=0,006 ve p=0,001). Teratozoospermili hastaların spermatozoonları persiste histonların varlığı nedeniyle DNA kırıkları ve epigenetik değişikliklere açıktır. Sonuç olarak, ICSI/IUI sikluslarında sperm seçme yöntemlerinin kullanılması ve özellikle swim-up yöntemini içeren bir protokolün tercih edilmesi önerilir.Anahtar kelimeler: spermatozoon, anilin mavisi, persiste histon,

In male infertility, teratozoospermia is one of the most common pathology with the incidence of 85%. Among them, 54% show severe isolated teratozoospermia. Besides, the effect of the histone-protamine exchange; that has a great importance in the maturation of the sperm and packing the paternal DNA; on the teratozoospermia cases is not known yet. The main purpose of this study was to determine the effect of the sperm preparation methods on the persistent histone levels of teratozoospermic patients. Sperm samples of 50 men; who were diagnosed with isolated teratozoospermia; were subjected to three different sperm preparation methods (density gradient centrifugation, swim-up and combination of two methods). The effectiveness of these methods on the elimination of the sperms containing the persistent histones was evaluated by comparing them with the raw sperm preparations. In this context, 4 preparations were prepared per patient and stained with aniline blue and 200 spermatozoa are evaluated for each one. The persistent histone ratio in the raw ejaculate was determined as 21,29 ± 9,53%. This ratio was 19,10 ± 9,33% in the spermatozoa obtained by the gradient method. The decrease in the persistent histone ratio between basal (raw) and gradient-selected sperms was not statistically significant. However, when swim-up and gradient + swim-up methods were used, the persistent histone ratios showed a significant decrease in comparison with the basal averages (3,65 ± 8,93% and 5,07 ± 9,33%, p= 0,006 and p= 0.001, respectively). The spermatozoa of the patients with teratozoospermia are open for the effects such as DNA breaks and epigenetic variations due to the existence of the persistent histones. In consideration with our findings, it is recommended to use sperm selection methods in ICSI/IUI cycles, particularly a protocol containing the swim-up method.Key words: spermatozoa, aniline blue, persistent histone, gradient,swim-up, infertility.509. KAYNAKLAR1. Evenson DP, Jost LK, Marshall D, Zinaman MJ, Clegg E, Purvis K, et