Sığırlarda embriyo kültür medyumuna ilave edilen protein kaynaklarının embriyonik gelişim üzerine etkileri

Abstract

ÖZETBu çalışmanın amacı, birçok araştırıcı tarafından kullanılmakta olan CR1aa kültürmedyumunda protein kaynağı olarak kullanılan sığır serum albumininin (BSA) yerine sentetikbir madde olan polivinilpirolidon (PVP) maddesinin kullanılıp kullanılamayacağınınbelirlenmesi ve normal şartlarda 4. günde kültür ortamına katılan fötal buzağı serumunun(FCS) embriyonik gelişim üzerindeki etkisinin incelenmesidir.Bu amaçla lokal bir mezbahadan elde edilen ovaryumlardan toplanan oositler in vitroşartlarda mature ve fertilize edildi. Fertilizasyondan 24 saat sonra, embriyolar rasgele iki grubabölündükten sonra grubun birinde embriyolar içerisinde 3 mg/ml oranında BSA bulunanCR1aa medyumunda kültür edilirken, diğerinde embriyolar içerisinde 3 mg/ml oranında PVPbulunan CR1aa medyumunda kültür edildi. Kültürün 4. gününde (fertilizasyon 0. gün) deayrıca her iki grupta yer alan embriyoların bir kısmına %10 oranında FCS ilave edilirken,geriye kalan embriyoların bulunduğu ortama FCS ilavesi yapılmadı. Embriyoların gelişimleritakip edildi ve özellikle embriyoların 2 hücre aşamasına ulaştıkları dönemde (kültürün 2. günü)ve blastosit aşamasına ulaştıkları 7. günde embriyolar sayılarak gelişim oranları belirlendi.İki hücreye bölünme ve morulaya gelişim oranları FCS ilavesi yapılan grup içinsırasıyla BSA'lı grupta %61,60 ve %32,32 iken, PVP'li grupta %55,56 ve %25,40 bulundu;FCS ilavesi yapılmayan grup içinse BSA'lı grupta %60,95 ve %27,89 iken, PVP'li grupta%55,73 ve %21,34 bulundu. İkiye bölünme oranları bakımından gruplar arasında istatistikselfark bulunmamış olsa da (P>0,05), BSA'lı grupların PVP'li gruplardan daha yüksek orandabölünme gözlendiği tespit edildi. Morula gelişim oranları bakımından da gruplar içinde sadeceFCS katılan BSA'lı ve FCS katılmayan PVP'li gruplar arasında istatistiksel fark bulundu(P<0,01).Sonuç olarak, CR1aa embriyo kültür ortamında BSA kullanılmasının gelişim oranlarınıolumlu yönde etkilediği sonucuna varıldı. Ayrıca, kültürün 4. gününde kültür ortamına FCSilavesinin yapılmasının embriyonik gelişimi pozitif yönde etkilediği gözlendi.Anahtar Kelimeler: Sığır, embriyo kültürü, CR1aa, BSA, PVP, FCSII

SUMMARYEffects of the protein sources added to the bovine embryo culture medium onembryonic developmentThe purpose of this study was to investigate the effect of fetal calf serum (FCS) addedto the culture milieu under normal conditions and the possibility of using a synthetic chemical,polyvinylpyrrolidone (PVP), instead of bovine serum albumin used as protein source in CR1aaculture medium used by many researchers.For this purpose oocytes collected from ovaries obtained from a local slaughterhousewere matured and fertilized. Twenty-four hours after fertilization, fertilized oocytes wererandomly divided into two groups. Embryos in one group were cultured in CR1aa mediumcontaining 3 mg/ml BSA and embryos in the other group were cultured in CR1aa mediumcontaining 3 mg/ml PVP. On fourth day of culture (fertilization day = 0) some embryos fromboth groups were supplemented with 10% FCS, and remaining embryos from both groups werenot supplemented with FCS. Embryonic development was observed and their developmentalratios were determined on days which embryos reach two-cell stage (second day of culture) andblastocyst stage (seventh day of culture).Cleavage rates and development rates to morula stage for group supplemented with FCSwere found 61.60% and 32.32% in BSA group and 55.56% and 25.40% in PVP group,respectively; for group not supplemented with FCS they were 60.95% and 27.89% in BSAgroup and 55,73% and 21.34% in PVP group. Even there was no statistical difference amonggroups in terms of cleavage rate (P>0.05), the cleavage rates of BSA groups were higher thanthe cleavage rates of PVP groups. In terms of development rates to morula there was asignificant difference only between the BSA group supplemented with FCS and the PVP groupnot supplemented with FCS (P<0.01).As a result, it was concluded that using BSA in CR1aa embrio culture milieu affects thedevelopment rate in a positive way. Moreover, FCS supplementation to the culture mediumalso affects the development rate in a positive way.Key Words: Cattle, embryo culture, CR1aa, BSA, PVP, FCSIII