Deneysel yangı oluşturulmuş Gökkuşağı alabalıklarında (Oncorhynchus mykiss Walbaum, 1792) timolün apoptoz üzerene etkilerinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, ön çalışmalarda dâhil olmak üzere toplam 400 gökkuşağı alabalığı (ort. 16,57±1,79 cm uzunluk; 44,71±6,43 gr ağırlık) kullanıldı. Dört deneysel grup oluşturulan araştırmada, ilk grup kontrol grubu olup deney süresince tüm optimal koşullar sağlandı. İkinci gruptaki balıklar 25 μg/ml lipopolisakkarit (LPS) ile intraperitonel olarak (i.p.) enfekte edildi ve infeksiyon grubu olarak değerlendirildi. Üçüncü grup balıklar enfekte edilmemiş ve yalnızca timol destekli yem takviyesi (100μg/ml/1 kg yem) ile beslendi. Son grubu oluşturan balıklar ise LPS ile enfeksiyon sonrası timol destekli yem ile beslendi. Deneme peryodu boyunca su sıcaklığı, pH, çözünmüş oksijen değerleri sırasıyla 15,5 oC, 8.01, 9.57 mg/L olarak belirlendi. Deneysel aşama 48 saat sonunda tamamlandı. Deneme süresi sonunda karaciğer doku örnekleri alındı ve apoptotik sitokinlerden kaspaz 3 (CAS-3), kaspaz 8 (CAS -8) ve tümör protein 53 (p53) gen ekspresyon seviyeleri araştırıldı. CAS-3, CAS-8 ve p53 genlerine spesifik dizayn ettirilen primerlerin en uygun yapışma (annealing) sıcaklıkları 55-60 oC arasında farklı ısı dereceleri uygulanarak, gradient PCR yöntemiyle saptandı. Timolün apoptotik etkinliği araştırıldı. LPS ile oluşturulan enfeksiyon sonunda balıklarda göz cidarında, kuyruk bölgelerinde hemorajiler, pullarda dökülmeler gözlendi.Apoptoz indükleyici genlerinden olan CAS-3 ve CAS-8 karaciğer dokusu ekspresyon seviyelerinin LPS uygulanan grupta kontrol grubuna göre sırasıyla 4 ve 12,81 misli değişimlerle uyarıldığı tespit edildi. Yalnızca timol içeren grupta CAS-3 gen ekspresyon seviyesi için herhangi bir değişim gözlenmedi fakat CAS-8 ekspresyonu 1,58 misli değişimlerle uyarıldı. Timol pre-inkübasyonundan sonra LPS eklenen grupta ise sırasıyla CAS-3 ve CAS-8 gen ekspresyon seviyelerinin 8,51 ve 37,79 misli değişimlerle indüklendiği ortaya konuldu. p53 gen ekspresyonu ise kontrol grubuna göre LPS ile 1,47 misli uyarıldı, timol grubunda bu artış 1,1 misli değişimlerle baskılandı. Ancak, son grupta p53 gen ekspresyon seviyesinde 7,06 misli artış tespit edildi.

In this study, including preliminary studies total 400 rainbow trout (mean 16.57±1.79 cm of length and 44.71±6.43 g of weight) was used. In this research created the four experimental groups, the first group is the control group was provided optimal conditions during all experiments. The fish in the second group were intraperitoneally (i.p.) infected by 25 mg / ml of lipopolysaccharide (LPS) and was evaluated as infection group. The fish in the third group was not infected and only the feed supported thymol (100μg/ml/1 kg of feed) was fed. The fish included the last group was fed by the feed supported thymol after infection with LPS. Water temperature, pH, dissolved oxygen values during the experimental period were fixed as 15.5 ° C, 8.01, 9.57 mg/l respectively. The experimental stage was completed after 48 hours. The liver tissue samples were removed at the end of the trial period and caspase 3 (Cas-3), caspase 8 (Cas-8) and tumor protein (p53) gene expression levels from apoptotic cytokines were investigated. Optimal adhesion (annealing) temperatures of the primers designed specifically Cas-3, Cas-8 and p53 genes analyzed by gradient PCR with applying different temperatures between 55-60 °C. Apoptotic activity of thymol was investigated. Hemorrhages in the eye wall and the tail region of the fish and loss of fish scales were observed at the end of infection caused by LPS.The liver tissue expression levels of Cas-3 and Cas-8 from the apoptosis-inducing genes in LPS-treated group were stimulated by the 4 and 12.81-fold changes compared to the control group. In the group consisting of thymol, any change was not observed for Cas-3 gene expression level, but Cas-8 expression was stimulated by 1:58 fold change. In LPS-added group after thymol pre-incubation, Cas-3 and Cas-8 gene expression levels were determined that induced with 8.51 and 37.79 fold changes. P53 gene expression level was stimulated 1.47 fold changes in LPS-treated compared to the control group. This increase was suppressed by 1.1-fold changes in the thymol group. However, p53 gene expression level was detected a significant increase by 7.06-fold changes in the last group.