Çeşitli candida türlerinin amfoterisin B, flukonazol ve vorikonazole duyarlılıklarının resazurin mikroplak yöntemiyle incelenmesi

Abstract

Candida infeksiyonlarının son yıllardaki artışı ve antifungal ajanlara karşı primer ve sekonder dirençgözlenmesi; tekrarlanabilirliği yüksek, hızlı sonuç verebilen, kolay uygulanabilir ve ucuz olan antifungal duyarlılıktestlerine ihtiyacı arttırmıştır.Bu çalışmanın amacı, NCCLS tarafından önerilen referans mikrodilüsyon yöntemi ve kolorimetrik resazurinmikroplak metodu ile elde edilen MûK değerlerini saptamak ve bu iki yöntemi karşılaştırarak, kolorimetrik resazurinmikroplak metodunun standart yönteme alternatif olup olmayacağını araştırmaktır.Kan kültürlerinden izole edilen 58 Candida kökeninin amfoterisin B, flukonazol ve vorikonazol duyarlılıklarıreferans yöntem ve kolorimetrik resazurin mikroplak metodu ile araştırıldı.Çalışmaya alınan Candida kökenlerinin standart klasik yöntemler ve gerekli görüldüğünde kromojenik besiyerive ID 32 C maya identifikasyon sistemi ile tür tayini yapılması sonucu %81 C. albicans, %19 non-albicans Candidaolarak saptandı.C. albicans için amfoterisin B, flukonazol, vorikonazol, MûK 50 ve MûK 90 değerleri referans yöntemdesırasıyla; 0.5-1, 0.25-0.5, ?0.015-?0.015 µg/ml, resazurin mikroplak metodu ile sırasıyla; 0.5-0.5, 0.25-0.5,?0.015-?0.015 µg/ml olarak bulundu. Non-albicans Candida için amfoterisin B, flukonazol, vorikonazol, MûK 50 veMûK 90 değerleri referans yöntemde sırasıyla; 0.5-1, 1-2, 0.03-0.06 µg/ml, resazurin mikroplak metodu ile sırasıyla;0.5-0.5, 0.5-1, ?0.015-0.06 µg/ml olarak bulundu.Çalışmamızın sonunda referans mikrodilüsyon yöntemiyle resazurin mikroplak yöntemi arasındaki uyum (±1dilüsyonda); C. albicans'lar için amfoterisin B'de %91.5, flukonazol'de %97.8, vorikonazol'de %100, non-albicansCandida'lar için ise amfoterisin B'de %100, flukonazol'de %100, vorikonazol'de %90.9 olarak saptanmıştır.Anahtar Kelime: Candida spp., Resazurin, mikroplak, mikrodilüsyon

The rise of Candida infections and observed resistance to primary end secondary antifungal agentsconsequently necessitated new atifungal susceptibility testing. These tests must be high repeated, more easy,cheaper and it must allow rapid result .The aim of this study is the comparasion of the colorimetric resazurin microplate method with the referencemicrodilution method proposed by NCCLS (M27-A2 document) for MIC values and also the evaluation of thecolorimetric resazurin microplate method as a alternative to the standard microdilution method.Susceptibilities of 58 Candida spp. isolates from blood cultures to amphotericinB, fluconazole andvoriconazole were observed by reference method and colorimetric resazurin microplate method.By using classical mycological methods 58 Candida strains were identified as follows: 81% C. albicansand 19% non-albicans Candida.For amphotericin B, fluconazole, voriconazole MIC 50 and MIC 90 values were; 0.5-1, 0.25-0.5,?0.015-?0.015 µg/ml respectively with reference method and 0.5-0.5, 0.25-0.5, ?0.015-?0.015 µg/ml respectivelywith resazurin microplate method for C. albicans and 0.5-1, 1-2, 0.03-0.06 µg/ml respectively with referencemethod and 0.5-0.5, 0.5-1, ?0.015-0.06 µg/ml respectively with resazurin microplate method for non-albicansCandida.In this study; the agreement (±1 twofold dilution) between colorimetric resazurin microplate method withthe reference microdilution method for C. albicans against the three antifungal agents was excellent, with the valuesfor amphotericinB, fluconazole, and voriconazole being 91.5, 97.8, 100% respectively, and 100, 100, 90.9%respectively for non-albicans Candida.Key Words: Candida, Resazurin, microplate, microdilution