Farelerde preimplantasyon gelişim sürecinde c-Abl proteinin lokalizasyonu

Abstract

Bu çalışma ile, non-reseptör protein tirozin kinaz ailesinin bir üyesi olan Abelson Tyrosine Kinase (c-Abl) proteinin farelerde yumurta ve preimplantasyon embriyo gelişimindeki rollerinin anlaşılması ve lokalizasyonun belirlenmesi amaçlandı. Bu amaçla oositler parthenogenez ile aktive edildi. Aktivasyon öncesi (0. saat) ve sonrasında farklı saatlerde (1., 2., 3., ve 6. saatler) toplanan yumurtalar tespit edildi, immunofloresan boyama uygulandı ve hem c-Abl lokalizasyonu hem de c-Abl proteinleri ile mekik iplikleri arasındaki ilişki araştırıldı. Sonrasında 2 hücreli, 8 hücreli, morula ve orta blastosist evresinde bulunan embriyolarda c-Abl lokalizasyonu araştırıldı. Ayrıca orta blastosist evresinde bulunan blastosistlerden immunocerrahi yöntemi ile iç hücre kitlesi (ICM) hücreleri izole edilerek bu hücrelerdeki c-Abl lokalizasyonuna bakıldı. Yapılan immunfloresan boyamalar sonucu elde edilen floresan ve konfokal lazer tarama mikroskop görüntüleri değerlendirildi. Metafaz II oositlerde ve preimplantasyon dönemi embriyolarının tümünde immunfloresan boyama ile tespit edilen c-Abl varlığı bu proteinin aktivasyon öncesinde oositlerde, sonrasında ise embriyolarda bir takım roller üstlendiğini gösterdi. Bu çalışma ile c-Abl proteinin yumurta korteksinde asimetrik bir lokalizasyona sahip olduğu belirlenmiştir ve bu bulgu c-Abl proteinin oositlerde mekik ipliği, kutup hücresi oluşumunda ve mekik ipliği oryantasyonunda önemli roller üstlendiğini göstermiştir. Ayrıca, implantasyondan ve plasentasyondan sorumlu trofektoderm hücrelerinin plazma membranında c-Abl protein lokalizasyonuna sahip olduğu ve bu veriye dayanarak c-Abl proteinin trofektoderm oluşumunda bir takım roller üstlendiği anlaşılmıştır.Anahtar kelimeler: c-Abl, Fare gelişimi, Preimplantasyon.

In this thesis, we aimed to understand the role and localization of c-Abl, the Abelson family of non-recepor tyrosine kinases, in eggs and preimplantation of mouse development. For this purpose, oocytes were artificially activated by parthenogenetic activation. Samples collected before (0 h) and after (1h, 2h, 3h, 6h) the activation procedure were fixed and immunofluorecently stained with c-Abl protein. And we looked for the localization of c-Abl proteins and relationships between c-Abl and spindle. After that we studied the localization of c-Abl proteins on 2 cell, 8 cell, morula and mid blastocyst stage embryos. In addition, inner cell mass (ICM) was isolated by immunosurgery and c-Abl localization was demonstrated on ICMs. The oocytes and embryos were imaged and assessed, using an fluorescence microscope and confocal laser scanning microscope. The presence of cAbl protein was examined in Metaphase II oocytes and all embryos from preimplantation development shows that c-Abl proteins have some roles on oocytes prior to activation and on embryos after the activation. In this study, c-Abl protein was determined to have asymmetrical localization in the egg cortex, suggesting possible roles in positioning of the metaphase II spindle and polar body formation and orientation. Besides that, cell membrane enrichment for c-Abl in trophectoderm, the tissue responsible for implantation and placentation, suggesting a possible role in trophectoderm formation.Key words: c-Abl, Mouse development, Preimplantation.