Amiloid proteininin tayini için duyarlı immünoassay yöntemlerinin geliştirilmesi

Abstract

Bu tez çalışmasının amacı, nörodejeneratif bir hastalık olan Alzheimer tayinindebiyomarker olarak kullanılan amiloid β (1-42) proteini için yeni bir zaman gecikmeliimmünoasssay (TR-FIA) yöntemi geliştirilmesidir. Bunun için, ilk olarak, ticari olaraktemin edilen 3,4bis [4(4,4,5,5,6,6,6 heptafloro1o,3dioksoheksil)fenil]benzensülfonilklorür (BHHCT) ve sentezi yapılan 10,10'-(4,4,5,56,6,7,7-oktafloro-3,8-dioksodekanediol) bis (antrasin-9-sülfonil klorür) (SD1) ligantlarıkullanılarak floresans etiketler oluşturuldu. Uygun immünoassay prosedürü oluşturulduve çeşitli deney parametreleri optimize edildi. Çalışmanın ikinci kısmında optimumveriler ışığında, hazırlanan etiketler kullanılarak, amiloid β (1-42) proteinine aitkalibrasyon çalışmaları mikro plate floresans okuyucuda Zaman GecikmeliFloroİmmünoassay (TR-FIA) tekniği yapıldı. Amiloid β (1-42) biyomolekülü içindoğrusal çalışma aralığı, BHHCT etiketi kullanılarak 0,5-10000 pg/mL olarak, SD1etiketi kullanılarak 0,5-4000 pg/mL olarak belirlendi. Son olarak oluşturulan assayınanalitik uygulanabilirliği, sentetik serum numunelerine amiloid β (1-42) proteini ilaveedilerek araştırıldı ve % geri kazanım değerleri hesaplandı.Anahtar Kelimeler: Amiloid β (1-42), Eu(III) Kompleks, Floresans etiketler, İmmünoassay,Zaman Gecikmeli Floro İmmünoassay (TR-FIA)

The aim of this thesis is to develop a new time delay immunoassay (TR-FIA)method for amyloid β (1-42) protein used as biomarker in the determination ofAlzheimer's disease which is a neurodegenerative disease. For this, firstly,commercially available 3,4bis [4 (4,4,5,5,6,6,6heptafluoro, 3dioxohexyl) phenyl]benzenesulfonylchloride (BHHCT) and synthesized 10,10 '- (4,4 Fluorescence labelswere generated using 5,56,6,7,7-octafluoro-3,8-dioxodecanediol) bis (anthracine-9-sulfonyl chloride) (SD1) ligands. The appropriate immunoassay procedure wasestablished and various experimental parameters were optimized. In the second part ofthe study, in the light of optimum data, calibration studies of amyloid β (1-42) proteinwere prepared by using labels prepared TR-FIA technique in Micro Plate FluorescenceReader. The linear working range for the amyloid β (1-42) biomolecule was 0.5-10000pg / mL for BHHCT and 0.5-4000 pg / mL for SD1 labels. Finally, when using assayanalysis, synthetic serum samples were calculated for examining amyloid β (1-42)protein and % recovery.Keywords: Amyloid β (1-42), Eu (III) Complex, Fluorescence labels, Immunoassay, TimeResolved Fluoro Immunoassay (TR-FIA)