Rekombinanat interlökin 2 ve İnterferon Alfa`nın ilerlemiş kanser hastalarında lenfositler üzerindeki in vivo immünolojik etkileri

Abstract

ÖZET Onkolojide rekombinant insan sitokinleri kullanarak yapılan immunoterapi giderek önem kazanmaktadır. Pan T-lenfosit uyarıcı olarak kullanılan IL-2'nin ise henüz klinikte uygulanacak etkin dozu ile ilgili konsensüs bulunmamaktadır. Bu çalışmada amaç düşük doz subkutan IL-2 ile tedavinin in vivo ımmun sistem üzerindeki etkilerini detaylı olarak incelemekti. On tane metastatik malign melanomlu hastadan periferik kan örnekleri alınarak `flow cytometric` yöntemle lenfosit alt gruplarına bakıldı. Hasta grubuna 4,5 Mi U günde subkutan rIL-2 başlandı. Lenfosit değerleri 6., 24. saat ve beşinci günde tekrar çalışıldı. CD2, CD3, CD4, CD8 pozitif T-lenfositler beşinci gün anlamlı olarak yükseldi (sırasıyla p=0,03, 0,03, 0,02, 0,003). Natural killer lenfositler 24. st yükseldi (p=0,008). CD2 T-lenfositlerde IL-2 reseptör ekspresyonu, CD3 T-lenfositlerde HLA-DR ekspresyonu ve T-Helper hücrelerin memori formu CD4/CD45RO'da 5. gün anlamlı olarak arttı (p=0,001, p=0,05, P=0,03). 11-2 ve IFN alpha kombinasyonu ile yapılan ilk faz I çalışma 1989'da yayınlanmıştır. Ancak aradan geçen on yıla rağmen bu kombinasyonun immun sistem üzerindeki in vivo etkileri henüz tam olarak aydınlatılmamıştır. Bu çalışmada 14 metastatik böbrek hücreli kanser hastasında düşük doz SC IL-2 ve IFN-alpha kombinasyonu uygulanmış. Hastalardan alınan inisyal, 3. gün ve 5. gün periferik kan örneklerinde akan hücresayarı `flow cytometry` ile Fas (Apo-l/CD95), Fas L, Bcl-2, CD25, HLA-DR ekspresyonu saptanmıştır. İmmunoterapi etkisiyle lenfositlerde Bcl-2 ekspresyonu 3. gün (p<0,025),FasL ekspresyonu 3. gün (p<0,004), Fas (Apo-l/cd95) ekspresyonu 5. gün (p<0,03) anlamlı artmıştır. Bu artış lenfositlerde 5. gün gözlenen Interlökin 2 reseptörü CD25 ve HLA-DR ekspresyonu ile korelasyon göstermiştir. Sonuç olarak düşük doz immunomodulatuvar tedavi ile de etkin immünolojik uyarılma oluşturulabileceği, immunoterapide oluşan lenfositozdan sorumlu mekanizmalardan bir tanesinin de Bcl-2 ekspresyonu olabileceği düşünülmüştür. Sonuçta düşük doz subkutan IL-2 ve IL-2 +IFN-alfa uygulamasının hem düşük yan etki profiline sahip hem de etkin bir immunostimulasyon oluşturabileceği kararma varıldı. 27

SUMMARY IL-2 is a glycoprotein with a significant immune effects. Our aims in this study were to define the early immune response of low dose IL-2 therapy in patients with metastatic malignant melanoma. Ten patients with metastatic malignant melanoma with no prior therapy and ten healthy persons as a control group were included in the study. IL-2 4.5 Mio U injected SC Dl-4 to the patients. Absolute values of CD2, CD3, CD4, CD8 T-cells increased significantly on day 5 (p=0.03, p=0.03, p=0.02, p= 0.003). CD 16/56 positive natural killer cells increased significantly at the 24th hour (p= 0.008). IL-2 receptor (CD25) expression on CD2 positive, and HLA-DR expression on CD3 positive T-cells increased markedly on the fifth day of treatment. (p=0.01, p=0.05). Memory T-helper cells (CD4/ CD45RO) showed a significant increase on day 5 (p=0.03). In conclusion low dose SC consecutive day administration of IL-2 leads early and effectively immunostimulation in patients with metastatic melanoma. Rosenberg et al published the first Phase I Trial with the combination of IL-2 and IFN-a in 1989. But there is still some questions about in vivo effects of this combination on lymphocytes. We designed a prospective pilot study to evaluete the effects of low dose IL-2 and IFN-a combination on expression of Bcl-2, FAS (Apo-l/CD 95), Fas Ligand, IL-2 receptor (CD25), and HLA-DR on peripheral lymphocytes of patients with advanced renal cell carcinoma. Percentage of Bcl-2 expressing lymphocytes increased significantly on day 3 (p<0,025). This increase continued on day 5 (p<0,001) but this transient increase reversed to nearly baseline values on day 14 Percentage of Fas (Apo-l/CD95) expressing lymphocyte first slightly decreased on day 3, but than significantly increased on day 5 (p< 0,03). This increase continued also significantly on day 14 (p< 0,001). Percentage of Fas ligand expressing lymphocytes increased significantly on day 3 (p<0,004) and on day 5 (p< 0,005) and decreased thereafter to baseline values on day 14. Percentage of FfLA-DR expressing lymphocytes increased significantly on day 5 ( p<0,003) but returned to baseline values on day 14. Percentage of IL-2 receptor (CD25) expressing cells first decreased on day 3 but than significantly increased on day 5 (p<0,01) and on day 14 (p< 0,013). We conclude that ctokine based immunomodulating therapy induce in vivo Bcl-2, Fas (Apo- 1 ) and Fas Ligand expression of lymphocytes significantly. 28