Chromatographic determination of glycoalkaloids in eggplant

Abstract

Adı-Soyadı: Neslihan TEKOkul: zmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüAnabilim Dalı: KimyaProgramı: Kimya (Yüksek Lisans)Tez Ba lı ı: Patlıcanda Glikoalkaloidlerin Kromatografik TayiniÖZETBu çalı mada, α-solanine, α-chaconine, α-solasonine ve α-solamargine steroidglikoalkaloidleri (SGAs) ile solanidine, solasodine steroid aglikonlarının (SGAAs)ayırım ve tayininde kullanılan, mevcut yüksek preformanslı sıvı kromatografisi(HPLC) ve gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi (GC-MS) yöntemlerindede i iklikler yapılmı tır. Gradient elüsyon metodu ile istenilen ayırım eldeedilememi ve incelenen glikoalkaloidler ya da aglikonlar için farklı HPLC metotlarıgeli tirilmesinin daha pratik oldu u görülmü tür. Solamargine ve chaconinemaddelerinin tayini için mobil faza literatürde bulunan metotlardan farklı olarakmetanol eklenmi tir. Di er tampon çözelti türlerine kıyasla amonyum dihidrojenfosfat tampon çözeltisi daha verimli ve kullanımı ekonomiktir. Glikoalkaloidler içinen iyi ayırım 50 ºC kolon scıcaklı ında, isokratik elüsyonla elde edilmi tir.Aglikonların ayırımı ise 50 ºC ya da 26 ºC kolon sıcaklıklarında, isokratik elüsyonlasa lanmı tır. Progesterone internal standard olarak kullanılmı tır.Son olarak, aglikon ekstraksiyonu ve tayini için fiber üzerinde türevlemeyapılarak katı faz mikroekstraksiyonu (SPME) ve GC-MS yöntemleri incelenmi tir.Ekstraksiyon için carbowax-divinylbenzene (CW-DVB) kaplı fiber uygunbulunmu tur. Solanidine do rudan SPME/GC-MS metodu ile tayin edilebilmesinera men solasodine türevleme uygunlandıktan sonra gözlenebilmi tir. Yapılan ilk nitelanalizler tekrarlanabilir olmasına ra men fiberin bozunması tam bir çalı mayapılmasına engel olmu tur. Ayrıca kolesterolün internal standard olarak kullanımıara tırılmı tır.

Name: Neslihan TEKSchool: zmir Institute of TechnologyDepartment: ChemistryMajor: Chemistry (Master)Title of Thesis: Chromatographic Determination of Glycoalkaloids in EggplantABSTRACTNovel modifications were applied to high-performance liquid chromatography(HPLC) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) for the separationand quantitation of the steroidal glycoalkaloids (SGAs) solanine, chaconine,solamargine, and solasonine as well as the steroidal glycoalkaloid aglycones (SGAAs)solasodine and solanidine. Because attempts to develop a gradient elution HPLCmethod were only marginally successfully and non-robust, it was deemed morepractical to develop separate HPLC methods for either the SGAs or SGAAs ofinterest. Furthermore, a novel approach using methanol as a mobile phase modifierwas still required to successfully separate solamargine and chaconine. Comparingpotential mobile phase buffers, ammonium dihydrogen phosphate was chosen as themost efficient, stable, and economical. Separations were best realized isocratically at acolumn temperature of 50 ºC for the SGAs and either 26 ºC or 50 ºC for the SGAAs.Progesterone was applied as an internal standard. Effects of pH were also tested.Figures of merit such as limit of detection (LOD), limit of quantitation (LOQ), andlinear dynamic range are described herein.Lastly, solid-phase microextraction (SPME) using on-fiber derivatizationcoupled with GC-MS was investigated for extraction and analysis of these SGAAs. Acarbowax divinylbenzene (CW-DVB) coated SPME fiber was the most suitable.Solanidine could be extracted and identified directly using our SPME/GC-MSmethod while solasodine required a derivatization step involvingtrimethylsilylimidazole (TMSI). Although initial attempts were qualitativelyreproducible, eventual degradation to fibers precluded complete study. Cholesterol asan internal standard was investigated.