The confirmation of the commercial kits used in the detection of antibiotics in milk with HPLC (High performance liquid chromatography)

Abstract

Bu çalışmada, ?Charm II Assay? testinin sütteki Beta-laktam, sülfonamid vetetrasiklin kalıntıları için HPLC doğrulaması yapılmıştır. Bu antibiyotiklerinkullanılmasının nedeni en çok kullanılan veteriner ilaçları olması ve bu yüzden buantibiyotiklerin saptanmasının süt kalitesi ve tüketici sağlığı açısından önemtaşımasıdır.?Charm II Assay? testinin doğrulama sonuçları testin incelenen antibiyotikleraçısından çok hassas olduğunu göstermiştir. Kör numunelerde ve MRL düzeyindeyüklenmiş numunelerin doğrulanmasında 100% doğru sonuç vermiştir.Doğrulama için HPLC ile elde edilen geri kazanım sonuçları ß-laktam için 47% -97%, tetrasiklin için 61.5%-84.8% ve sulfonamid için 50.4%-54.6% değerleri arasındabulunmuştur.Doğal olarak kontamine olmuş örneklerde yapılan analizler Charm II testininyanlış pozitif sonuç verebileceğini göstermiştir. Fakat bu sonuç testin çok hassasolmasından ve bazen HPLC aletinin testin saptama limitine ulaşamamasındankaynaklanabilmektedir ya da sütte HPLC metodunun tespit edemediği gruptaki başkabir antibiyotik çeşidinin bulunduğu tahmini yapılabilir.Beta-laktam tayini için toplanan 81 örnekten yalnızca ikisi MRL üstündesaptanmıştır ve saptanan miktarlar sırasıyla penicilin-G için 6.5 ppb ve ampicillin için23.8 ppb'dir. Bu antibiyotikler için MRL 4 ppb dir. Tetrasiklin kalıntıları için araştırılannumuneler arasında pozitif çıkan örnekler HPLC de doğrulaması yapıldıktan sonrasonuçlar MRL seviyeleri altında bulunmuştur ya da hiç bulunmamıştır. Sulfonamidtayini için toplanan 46 örnekten yalnızca birinde MRL üzerinde bir değer bulunmuştur,bu değer is 119 ppb sulfomethazinedir.5 Market süt örneği ile yapılan analizlerde hiçbir antibiyotik kalıntısınarastlanmamıştır. Sadece sülfonamid grubu Charm II Assay testinde 4 tane pozitif sonuçvermiş fakat örneklerin HPLC de doğrulaması yapıldıktan sonra hiçbir kalıntı tespitedilmemiştir

In this study, Charm II Assay was confirmed by HPLC for ß-lactam,sulphonamide and tetracycline residues in milk. These antibiotics were chosen becausethey are most frequently used veterinary drugs and their detection have importance formilk quality and consumer?s health.The results for confirmation of Charm II Assay showed that the test was verysensitive to all groups that were investigated and showed %100 true results for blanksamples and spiked samples that were fortified with mixed standards at MRL(maximum residue limit) for each group.Average recoveries of HPLC used for confirmation were between 47% to 97%for beta-lactams, 61.5% to 84.8% for tetracyclines and 50.4% to 54.6% forsulphonamides.The results of analysis with the naturally contaminated milk samples showed thatCharm II Assay may give false positive results. But this might be because of the highsensitivity of the test that sometimes HPLC may not reach that detection limit of CharmII assay or the milk samples may contain other compounds of investigated antibioticsthat HPLC method can not detect.In samples that were collected for ß-lactam determination, only 2 out of 81samples were detected above MRL where the amounts were 6.5 ppb penicilin-G and23.8 ppb ampicillin. The MRL for these ß-lactam antibiotics are specified as 4 ppb byEuropean Union regulations. The samples investigated for tetracycline residues whichwere found as positive and confirmed by HPLC were below MRL or negative. Insamples investigated for sulphonamides only one sample out of 44 was above MRLwhere the amount was 119 ppb sulfamethazine.Analysis with 5 commercial milk samples showed none antibiotic residues. Only4 samples out of 5 for sulphonamides were screened positive but after confirmation noresidues were detected in these samples.